Снип минимальная глубина заложения фундамента: Глубина заложения фундамента – Расчет онлайн

Глубина заложения ленточного фундамента дома

Глубина заложения ленточного фундамента под дом, расчет и заливка

Расчет глубины заложения фундамента по СП 22.13330.2011

5.5.2. Нормативную глубину сезонного промерзания грунта d_fn, м, принимают равной средней из ежегодных максимальных глубин сезонного промерзания грунтов (по данным наблюдений за период не менее 10 лет) на открытой, оголенной от снега горизонтальной площадке при уровне подземных вод, расположенном ниже глубины сезонного промерзания грунтов.

При использовании результатов наблюдений за фактической глубиной промерзания следует учитывать, что она должна определяться по температуре, характеризующей согласно ГОСТ 25100 переход пластичномерзлого грунт

5.5.2. Нормативную глубину сезонного промерзания грунта d_fn, м, принимают равной средней из ежегодных максимальных глубин сезонного промерзания грунтов (по данным наблюдений за период не менее 10 лет) на открытой, оголенной от снега горизонтальной площадке при уровне подземных вод, расположенном ниже глубины сезонного промерзания грунтов.

При использовании результатов наблюдений за фактической глубиной промерзания следует учитывать, что она должна определяться по температуре, характеризующей согласно ГОСТ 25100 переход пластичномерзлого грунта в твердомерзлый грунт.

5.5.3. Нормативную глубину сезонного промерзания грунта d_fn, м, при отсутствии данных многолетних наблюдений следует определять на основе теплотехнических расчетов. Для районов, где глубина промерзания не превышает 2,5 м, ее нормативное значение допускается определять по формуле

                                                        (5.3)

где М_t — безразмерный коэффициент, численно равный сумме абсолютных значений среднемесячных отрицательных температур за год в данном районе, принимаемых по СНиП 23-01, а при отсутствии в нем данных для конкретного пункта или района строительства — по результатам наблюдений гидрометеорологической станции, находящейся в аналогичных условиях с районом строительства;

d₀ — величина, принимаемая равной для суглинков и глин 0,23 м; супесей, песков мелких и пылеватых — 0,28 м; песков гравелистых, крупных и средней крупности — 0,30 м; крупнообломочных грунтов — 0,34 м.

Значение d₀ для грунтов неоднородного сложения определяют как средневзвешенное в пределах глубины промерзания.

Нормативная глубина промерзания грунта в районах, где d_fn > 2,5 м, а также в горных районах (где резко изменяются рельеф местности, инженерно-геологические и климатические условия), должна определяться теплотехническим расчетом в соответствии с требованиями СП 25.13330

Онлайн расчет глубины заложения фундамента

Минимальную глубину заложения фундаментов во всех грунтах, кроме скальных, рекомендуется принимать не менее 0,5 м, считая от поверхности наружной планировки. (РУКОВОДСТВО ПО ПРОЕКТИРОВАНИЮ ОСНОВАНИЙ ЗДАНИЙ И СООРУЖЕНИЙ , МОСКВА 1978).

Расчетная глубина промерзания

5.5.4. Расчетную глубину сезонного промерзания грунта d_f, м, определяют по формуле

d_f = k_h d_fn,                                                                (5.4)

где d_fn — нормативная глубина промерзания, м, определяемая по 5.5.2 — 5.5.3;

k_h — коэффициент, учитывающий влияние теплового режима сооружения, принимаемый для наружных фундаментов отапливаемых сооружений — по таблице 5.2; для наружных и внутренних фундаментов неотапливаемых сооружений k_h = 1,1, кроме районов с отрицательной среднегодовой температурой.

Таблица 5.2

Примечания

1. В районах с отрицательной среднегодовой температурой расчетная глубина промерзания грунта для неотапливаемых сооружений должна определяться теплотехническим расчетом в соответствии с требованиями СП 25.13330. Расчетная глубина промерзания должна определяться теплотехническим расчетом и в случае применения постоянной теплозащиты основания, а также, если тепловой режим проектируемого сооружения может существенно влиять на температуру грунтов (холодильники, котельные и т.п.).
2. Для зданий с нерегулярным отоплением при определении k_hза расчетную температуру воздуха принимают ее среднесуточное значение с учетом длительности отапливаемого и неотапливаемого периодов в течение суток.

Глубина заложения фундаментов

5.5.5. Глубина заложения фундаментов отапливаемых сооружений по условиям недопущения морозного пучения грунтов основания должна назначаться:

для наружных фундаментов (от уровня планировки) по таблице 5.3;

для внутренних фундаментов — независимо от расчетной глубины промерзания грунтов.

Глубину заложения наружных фундаментов допускается назначать независимо от расчетной глубины промерзания, если:

специальными исследованиями на данной площадке установлено, что они не имеют пучинистых свойств;

специальными исследованиями и расчетами установлено, что деформации грунтов основания при их промерзании и оттаивании не нарушают эксплуатационную надежность сооружения;

предусмотрены специальные теплотехнические мероприятия, исключающие промерзание грунтов.

Таблица 5.3

5.5.6. Глубину заложения наружных и внутренних фундаментов отапливаемых сооружений с холодными подвалами и техническими подпольями (имеющими отрицательную температуру в зимний период) следует принимать по таблице 5.3, считая от пола подвала или технического подполья.

При наличии в холодном подвале (техническом подполье) отапливаемого сооружения отрицательной среднезимней температуры глубину заложения внутренних фундаментов принимают по таблице 5.3 в зависимости от расчетной глубины промерзания грунта, определяемой по формуле 5.4 при коэффициенте kh = 1. При этом нормативную глубину промерзания, считая от пола подвала, определяют расчетом по 5.5.3 с учетом среднезимней температуры воздуха в подвале.

Глубину заложения наружных фундаментов отапливаемых сооружений с холодным подвалом (техническим подпольем) принимают наибольшей из значений глубины заложения внутренних фундаментов и расчетной глубины промерзания грунта с коэффициентом kh = 1, считая от уровня планировки.

5.5.7. Глубина заложения наружных и внутренних фундаментов неотапливаемых сооружений должна назначаться по таблице 5.3, при этом глубина исчисляется: при отсутствии подвала или технического подполья — от уровня планировки, а при их наличии — от пола подвала или технического подполья.

5.5.8. В проекте оснований и фундаментов должны предусматриваться мероприятия, не допускающие увлажнения грунтов основания, а также промораживания их в период строительства.

5.5.9. При проектировании сооружений уровень подземных вод должен приниматься с учетом его прогнозирования на период эксплуатации сооружения по подразделу 5.4 и влияния на него водопонижающих мероприятий, если они предусмотрены проектом (см. раздел 11).

Глубина заложения фундамента –

При любом строительстве глубина заложения фундамента является одной из важнейших расчетных проектных характеристик. Она определяется по нормам СНиП 2.02.01-83 и выполнить правильный расчет можно самостоятельно. От правильного расчета зависит несущая способность всего здания и его долговечность, а также стоимость самих работ и материалов. Наша компания готова заняться строительством фундамента под ключ Вашего дома.

Глубина заложения фундамента зависит от типа грунта, глубины промерзания, от параметров и назначения постройки, климатической зоны. Основная характеристика почвы в этом случае — пучинистость или непучинистость. Пучинистые грунты промерзают в зимнее время, в результате чего увеличиваются в объеме. Непучинистыми являются почвы, где земля не промерзает в силу климатических условий или имеют скальную каменистую, песочную структуру.

В наших климатических условиях большинство грунтов являются пучинистыми. Глубина заложения фундамента в них определяется глубиной промерзания грунта:

при глубине промерзания до 1 м фундамент закладывается на глубину 0.5 м;

• при промерзании до 1.5 м фундамент закладывается на 0.75 м;
• промерзание о 2.5 м — закладка на 1 м;
• промерзание на 3.5 м — фундамент на глубине 1.5 м.

Другие величины принимаются на непучинистых почвах:

• промерзание до 2 м — закладка на 0.5 м;
• промерзание до 3 м — фундамент на 0.75 м;
• промерзание от 3 м — фундамент на глубине 1 м.

До недавнего времени использовалось общее правило для всех типов почв: глубина заложения фундамента принималась на 0.5 м ниже, ем глубина промерзания. Но такой подход делает строительство слишком затратным и сейчас чаще используется достаточная минимальная безопасная глубина.

Принимается во внимание и вес строения, который рассчитывается исходя из массы используемых материалов, предполагаемого внутреннего оборудования и коммуникаций, нагрузок в зависимости от сезонных условий. При деревянном домостроении глубина заложения фундамента может быть меньше, чем при возведении тяжелых кирпичных жомов, но при расчете во внимание принимаются обильные снегопады.

Если к уже существующим строениям достраиваются новые корпуса, вес готовой конструкции также должен учитывать общую массу всего строения, часть которой придется на фундамент новой конструкции. Пользуясь параметрами СНиПа, можно учесть все необходимые данные и выбрать оптимальную по характеристикам и стоимости работ глубину заложения фундамента.

Как определить глубину зелегания фундамента

Минимальная глубина заложения фундамента зависит от нескольких ключевых факторов:

• — от характера грунта;
• — от уровня грунтовых вод;
• — от уровня промерзания грунта;
• — от капитальности здания;
• — от конструктивных особенностей здания (наличие подвалов, нескольких этажей, фундаментов примыкающих зданий).

Наименьшая допустимая глубина заложения фундамента 50 см от поверхности планировки.

Для одноэтажных промышленных зданий без динамических нагрузок и кранов, а также для гражданских и жилых зданий высотой не более двух этажей, в случае промерзания грунта на 70 см и более, нижняя часть фундамента может быть заменена на подушку из щебня, гравия, крупного или среднезернистого песка.

В этом случае высота верхней каменной части фундамента должна быть не менее полуметра. Если в качестве подушки используется среднезернистый песок, то основание подушки должно превышать уровень грунтовых вод.

Когда фундамент или фундаментная подушка закладывается на пылеватом или мелком песке, суглинке, глине или супеси, все перечисленные грунты основания должны быть хорошо защищены от попадания воды с поверхности.

Для этого необходимо устроить вокруг здания водоотводные лотки или отмостки. Глубина заложения такого фундамента должна превышать расчетную глубину промерзания грунта.

Фундаменты внутренних колонн и стен отапливаемых зданий закладываются вне зависимости от глубины промерзания грунта и уровня грунтовых вод. Однако глубина заложения таких фундаментов не должна быть менее 50 см.

Если фундаменты внутренних стен закладываются выше стен наружных фундаментов, возникает необходимость заложить основание против промерзания. Такое основание закладывается как в период строительства, так и после его окончания.

Расчет глубины  по СНиП

Согласно СНиП, фундаменты закладываются в зависимости от степени промерзания грунтов. Глубину промерзания грунта определяют по формуле:

где k_h — коэффициент, определяющий насколько тепловой режим здания влияет на промерзание грунта у наружных стен,

а d_fn — нормативная глубина промерзания грунта.

Значение коэффициента в зависимости от особенностей сооружения:

Глубина заложения фундаментов зданий без подвалов считается от уровня планировки, при наличии подвалов — от пола подвала.

Фундамент здания, а также его отсеков, во всех точках должен закладываться на одном уровне.

Глубина заложения в зависимости от типа фундамента

Ленточный фундамент

Ленточный фундамент закладывают по всему периметру строения. При закладке такого фундамента учитывается толщина стен как внутренних, так и внешних.

Фундамент ленточного типа чаще всего имеет форму трапеции, прямоугольника, иногда это ступенчатые фундаменты, или фундаменты с расширенной нижней частью.

Ленточные фундаменты делятся на сборные и монолитные. Монолитные более надежны и долговечны. Помимо этого монолитные фундаменты совместимы со зданиями любого типа и формы.

Сборный фундамент быстрее сооружается, за счет этого дороже стоит. В сборных фундаментах не исключается отсутствие герметичности стыков плит, что может привести к попаданию воды.

Встречаются ленточные фундаменты кирпичные и бутовые. Кирпичный фундамент заложить сложнее, к тому же такие фундаменты не слишком прочны. Бутовые фундаменты более прочные, но дорогостоящие.

Укладка бутового фундамента осложняется подбором одинаковых бутовых камней.

Ленточные фундаменты закладывают на ниже глубины промерзания на 20 см, но не более 50-70 см от уровня планировки.

Свайный фундамент

Свайные фундаменты наиболее популярны. Такие фундаменты очень прочны и практически не деформируются. Чаще всего сваи для такого фундамента изготавливаются из тяжелого бетона. Выбор свай для фундамента определяется типом грунта.

Фундамент свайного типа закладывается на глубину от 100 см и выше. Расчет глубина залегания такого фундамента также определяется типом грунта.

Сборный фундамент

Сборный фундамент, называемый также блочным, закладывают под частные дома небольших размеров. Как правило, это дома с цокольным этажом и подвалом.

Чаще всего сборные фундаменты закладывают на песчаной почве. Не рекомендуется укладка фундаментов данного типа на глине и суглинке. Глубина заложения блочного фундамента — 1-2 блока.

Столбчатый фундамент

Такие фундаменты закладывают под здания облегченной конструкции. Это сооружения со стенами из каркасно-щитовых материалов или дерева.

Столбы фундамента изготавливаются из бетона, кирпича, камня, иногда из дерева, и имеют длительный срок эксплуатации. Сам процесс заложения фундамента сравнительно простой и экономичный.

Фундаменты столбчатого типа стоит применять в районах, где промерзание почвы очень сильное. К недостаткам таких фундаментов можно отнести их нестабильность. Фундамент столбчатого типа закладывают на глубину, на 10-25 см превышающую промерзания грунта.

Плитный фундамент

Сплошные или плитные фундаменты закладывают на почвах с высоким уровнем грунтовых вод. Иногда такие фундаменты применяют на песчаных подушках или вспучивающихся грунтах. Фундамент сплошной конструкции складывается из монолитных железобетонных плит.

Сплошные фундаменты устойчивы к любым перемещениям грунта, горизонтальным и вертикальным. Заложить такой фундамент довольно просто, однако процесс это довольно дорогостоящий из-за объема материалов.

Глубина заложения плитного фундамента 40-50 см.

Заложение фундамента дома: определение различных показателей

Как минимум одной четвертой всех затрат на строительство дома является стоимость закладки фундамента. Исправление всех обнаруженных недочетов может значительно вывести расходы за рамки бюджетной сметы. Кроме того, чем выше находится основание, тем понадобится меньше строительных материалов. Поэтому большое значение имеет ответственное отношение к расчетам глубины заложения.

Определение

Учитывают следующие факторы:

• характер грунтов;
• уровень грунтовых вод;
• степень промерзания;
• массивность и долговечность будущего здания;
• конструктивные особенности строения (наличие подвалов и примыкающих построек).

Зная эти показатели, можно определить какая должна быть глубина фундамента для одноэтажного деревянного дома и для капитального многоуровневого здания. Нижнюю часть каменных одноэтажных построек, которые не имеют динамических нагрузок, и двухэтажных в условиях промерзания почвы до 70 см можно заменять подушкой из щебня, гравия, средне- и крупнозернистого песка. Но её основание должно быть выше грунтовых вод.

Определение и расчет глубины заложения ленточного фундамента происходит на основе сравнения возможных решений конструкции, сметной стоимости и технических характеристик. Выбор должен учитывать все особенности строительства здания на разных типах основания.

Также следует учитывать пучинистость, просадочность и другие состояния грунта, сейсмичность района и рельеф местности.

Расчет глубины промерзания

В России для каждой географической местности определены нормативы промерзания, где в зимний сезон температура составляет от 0 до -1 °C. Точкой расчета является среднее значение данных по наблюдениям за несколько лет:

• Москва и Подмосковье, Санкт-Петербург, Новгород, Тверь, Воронеж – норматив находится в пределах 140-160 см,
• Кострома, Нижний Новгород, Чебоксары, Саратов, Пенза – 150 см;
• Минск, Киев, Ростов-на-Дону, Астрахань – 100 см,
• Великие Луки, Курск, Волгоград, Смоленск, Псков, Харьков – 120 см;
• Ульяновск, Самаре, Вятка, Казань, Ижевск – 170 см;
• Восточные и северные области Украины – до 100 см, южные – 60 см, остальные – 80 см.

Для отапливаемых зданий расчетная величина на 10-30% меньше нормативной в зависимости от расположения полов (на грунте, на лагах или балках). Помимо географического положения местности, промерзание определяется уровнем грунтовых вод. Причиной промерзания является повышенная влажность и минусовая температура. [note]Нормативную глубину промерзания определяют по формуле:

H = k*M,

• K – коэффициент грунта,
• М – сумма значений среднемесячных температур ниже нуля.

Для глины k равен 0,23, супеси – 0,28, песка – 0,3, крупнообломочных – 0,34. Абсолютные значения отрицательных зимних температур указаны в СНиПе на основания.[/note]

Уровень грунтовых вод

Уровень грунтовых вод (УГВ) зависит от типа местности. Так, на ровных участках они распространены по всей площади практически на одинаковой глубине, а в пониженной части местности располагаются ближе к поверхности грунта. Данные об уровне их залегания требуют точной оценки поскольку ими будет определяться глубина котлована под фундамент. Существует два способа определения грунтовых вод:

1. Анализ уровня воды в колодцах.
2. Бурение скважин.

Первый метод считается более точным, поскольку в колодцах, вырытых от 5 до 15 м вглубь, статичный уровень воды равен УГВ в этой местности. Второй метод подразумевает бурение скважины 2-2,5 м. Его выполняют при помощи садового бура, а далее наблюдают скопление воды. Если дно остаётся сухим, то воды залегают на большой глубине и не представляют опасности. Самое удачное время для определения УГВ – весна, когда его значение самое высокое. На заболоченных территориях УГВ составляет менее 1 м. Если мелкие впадины залиты водой, то уровень находится выше поверхности грунта. В засушливые периоды он понижается, а в дождливые повышается. Колебания составляют от 0,5-2 м. Если от 3 до 5 м от поверхности грунтовые воды не обнаружены, то определять их залегание не обязательно, поскольку они никак не влияют на строительство фундаментов или погребов.

Минимальная глубина

Минимальная величина заложения зависит от вида фундамента и типа грунта. Так для мелкозаглубленного ленточного она определяется степенью промерзания почвы, пучинистостью и УГВ. Чем ближе к поверхности грунтовые воды и больше промерзает грунт, тем сильнее силы пучения, которые воздействуют на конструкцию снизу, сбоку и по касательной. Они выталкивают и сдавливают мелгозаглубленный фундамент. Поэтому существуют различные стандарты заглубления. Минимальная глубина заложения фундамента для двухэтажного дома без подвала не должна быть меньше полуметра от поверхности при условии, если здание расположено не на скальном грунте. В сооружениях с подвалами это значение принимается за 0,5 м относительно пола. На плотных (утрамбованных) грунтах допускается приравнивать глубину заложения к высоте подготовке под полы. В зависимости от степени промерзания грунтов СНиП 2-Б.1-62 проводит следующую градацию рекомендуемых минимумов:

расчет, определение минимального значения для дома, также что это такое, от чего зависит залегание и когда изменяется ступенчато?

Глубина заложения для разных типов фундамента требует особого внимания. Именно она, являясь важнейшим параметром, во многом определяет надежность, устойчивость и долговечность всего сооружения.

Действующие строительные правила и нормативы определяют основной порядок выбора и методики расчетов. При проектировании дома важно выявить основные эксплуатационные факторы, и учесть степень их воздействия.

Что это такое?

Глубина заложения фундамента представляет собой расстояние от подошвы до поверхности земли.

По сути, это высота его поземной части, определяющая место расположения опорной площадки и площадь боковых, заглубленных фундаментных стенок.

Изменяя глубину заложения, можно решать такие задачи:

1. Повышение устойчивости сооружения за счет увеличения площади подземной части с боковой опорой на грунт.
2. Повышение несущей способности за счет увеличения размеров основания.
3. Оптимальное расположение площадки контакта фундамента с грунтом, что дает возможность устанавливать подошву на наиболее прочный и стабильный пласт.

Правила определения данного параметра установлены нормативными документами: СНиП 2.02.01-83 и СП 22.13330.2011.

От чего зависит?

Проектная глубина фундамента, в общем случае, зависит от геологических, гидрологических, климатических и конструктивных особенностей местности, участка и самого здания.

Наиболее значительное воздействие оказывают следующие факторы:

1. Назначение сооружения и особенности его эксплуатации.
2. Конструктивные факторы: размеры сооружения, тип фундамента, количество этажей, наличие подвала, расположение инженерных коммуникаций.
3. Нагрузка на фундамент, определяемая общим эксплуатационным весом сооружения, а также массой снежного накопления.
4. Свойства грунта: тип и структура, стабильность, пучинистость, увлажнение и т.п.
5. Глубина промерзания грунта.
6. Глубина залегания грунтовых вод.
7. Климатические факторы: степень ветровой нагрузки, сейсмичность, паводковые ситуации и т.д.
8. Рельеф участка.

Существуют общие правила определения глубины залегания фундамента, но каждый тип фундамента имеет и определенные нюансы. Различные способы используются для мелкозаглубленных и заглубленных фундаментов.

Промерзание грунта

Одним из важнейших воздействующих факторов считается глубина промерзания грунта. Дело в том, что при замерзании вода, находящаяся в почве, расширяется, увеличивая объем. В результате на фундамент начинает воздействовать дополнительная нагрузка со стороны грунта.

Если для боковых, упрочненных стенок она не столь опасна, т.к. гасится за счет высокой прочности конструкции, то снизу появляется сила, направленная на выталкивание опоры.

Величина такой нагрузки зависит от пучинистости грунта, т.е. степени его расширения при замерзании. Соответственно весной при оттаивании происходит обратный процесс. В результате ежегодных колебаний материал фундамента постепенно разрушается, снижая долговечность здания.

Указанные процессы, происходящие в зоне промерзания, требуют, чтобы фундаментная подошва на пучинистых почвах располагалась ниже уровня промерзания. В малопучинистых грунтах (песчаники, скалистые выходы и т.д.) воздействие менее значительны и можно использовать мелкозаглубленный фундамент.

Глубина промерзания грунта устанавливается по результатам многолетних наблюдений и различна для разных регионов страны. Она зависит от среднесуточной температуры и типа почвы.

Так в Московском регионе при среднесуточной температуре минус 10⁰C глубина промерзания составляет:

• глины и суглинки – 78 см;
• супесь и пылевой песок – 95 см;
• песок средней и крупной зернистости, гравелистый грунт – 1 м;
• грунты крупнообломочного типа – 1,16 м.

Усредненные данные по уровню промерзания грунта в разных регионах РФ приведены в СНиП 23-01-99 и СП 131.13330.2011. По ним составляется карта всей территории.

В процессе эксплуатации зданий может происходить изменение процесса промерзания за счет тепловых потоков.

Корректировка глубины промерзания производится по формуле: Н = m x Но, где:

• Но – нормативная (табличная) глубина промерзания,
• m – коэффициент влияния теплового режима сооружения, в т.ч. отопительных приборов.

Коэффициент колеблется в пределах 0,4-1,1.

Если табличные данные отсутствуют, то глубину промерзания можно рассчитать по формуле: Н = Hi√Mt, где:

• Hi – нормативная глубина промерзания определенного типа грунта,
• Mt – среднемесячная минусовая температура в зимний период.

Определение величины заглубления

При строительстве дома возникает вопрос: как определить глубину заложения? Для заглубленного фундамента существует следующее правило: она должна быть на 20-30 см больше глубины промерзания и на 50-60 см меньше глубины расположения подземных вод. На выбор величины параметра мало влияют конструкционные и эксплуатационные нагрузки.

По экономическим соображениям считается, что ленточный фундамент целесообразно возводить с глубиной заложения до 2,5 м. При больших значениях лучше использовать столбчатый или свайный тип.

Мелкозаглубленный фундамент имеет заглубление порядка 35-50% от глубины промерзания. Этот вариант характерен для монолитной плиты в любом грунте, а также ленточного или столбчатого фундамента при строительстве на малопучинистых грунтах.

Расчет глубины фундамента проводится с учетом нагрузок от сооружения и несущей способности грунта. Глубина промерзания также вносит свои коррективы, но путем практических рекомендаций.

Формула для расчета

Как рассчитать глубину заложения фундамента под дом? Расчет осуществляется согласно СП 22.13330.2011 по формуле.

Формула расчета глубины промерзания

Н = Hi√Mt

• Н – глубина промерзания,
• Hi – нормативная глубина промерзания определенного типа грунта,
• Mt – среднемесячная минусовая температура в зимний период.

Значение Hi составляет:

• 23 см в глинах,
• 28 см в песчанике пылевого типа,
• 30 см в крупнозернистом песчанике,
• 34 см в каменистых грунтах.

Пример

Рассмотрим строительство сооружения на глиняных почвах и в Московском регионе. Для Москвы характерны средние температуры: декабрь – минус 10, январь – минус 16, февраль – минус 18⁰C.
Тогда рассчитываем глубину промерзания:   Н= 0,23√(10+16+18)= 1,1 м.

Корректировка производится с учетом коэффициента влияния теплового режима сооружения m. Его значение устанавливает СНиП 2.02.01-83 и СП 25.13330 с учетом среднесуточных температур, поддерживаемых в помещении.

В указанных документах можно по таблице уточнить m для зданий с различным режимом проживания, разной конструкцией напольного перекрытия, с учетом наличия утеплений и подвала.

Для дома с утепленным цоколем в Московском регионе при среднесуточной температуре в помещении 10-12⁰C можно принять m=0,9.

Окончательно, расчетное промерзание составит: Н х m = 1,1 х 0,9 = 0,99 м.

Глубина заложения фундаментов в соответствии с требованиями таблицы 2 СНиП 2.02.01-83*

Далее необходимо учесть расположение подземных вод. Если они располагаются на глубине более 3 м, то глубина заложения фундамента должна быть не менее глубины промерзания.

С учетом рекомендаций принимает, заглубление равным Н+0,3 м, т.е. 1,3м. Эта глубина должна обеспечить надежность и долговечность ленточного или столбчатого фундамента.

Минимальные и максимальные значения

Для заглубленного фундамента минимальное заглубление равно глубине промерзания грунта, а максимальная глубина заложения фундамента не должна достигать грунтовых вод минимум на 0,5 м.

Минимальное заложение мелкозаглубленного фундамента устанавливает СНиП 22.13330.2011 с учетом промерзания в такой зависимости:

• непучинистые почвы с промерзанием до 2 м или слабопучинистые грунты с промерзанием до 1 м – глубина заложения фундамента составляет не менее 0,5 м;
• при промерзании указанных грунтов в пределах 2-3 и 1-1-1,5 м, соответственно – 0,75 м:
• при промерзании более 3 м и в пределах 1,5-2,5 м, соответственно, – 1 м;
• при промерзании слабопучинистых грунтов на глубину более 2,5 м – 1,5 м.

Температура внутри дома позволяет корректировать заглубление мелкозаглубленного фундамента.

Так для неотапливаемого дома в Московском регионе минимальная глубина заложения фундамента составляет 0,5 м. Если в течение года поддерживается среднесуточная температура в помещении не ниже 10 градусов, то минимальное заглубление составляет 0,4 м, а при температуре 20 градусов – 0,28 м.

Приведенные минимальные значения рассчитаны на одноэтажные строения. При возведении 2-х этажного сооружения их следует удвоить. Более высокие здания на мелкозаглубленном фундаменте не возводятся.

При строительстве на высокопрочных грунтах (скальные выходы, крупнообломочные грунты) фундамент предназначен лишь для перераспределения нагрузок равномерно по всей площади.

Минимальная глубина заложения фундамента составляет 0,3 м. Аналогично выбирается заглубление для монолитного плитного фундамента.

Когда изменяется ступенчато?

При строительстве дома на участке с уклоном, необходимо ступенчатое изменение глубины заложения фундамента. В таких случаях используются конструкции ленточного и столбчатого типа.

Наибольшей надежностью обладает бетонная лента. Этот тип фундамента можно сооружать на склонах с наклоном до 28-35 градусов.

Суть ступенчатого фундамента заключается в том, что нижняя стена является подпорной стеной и имеет повышенную глубину заложения.

Схема его выглядит следующим образом: вначале, готовится траншея для верхней стене с глубиной, равной расчетной глубине.

Под нижнюю, подпорную стену роется траншея такой же глубины, но опалубка поднимается на такую высоту, чтобы ее верхняя граница находилась строго в одной горизонтальной плоскости с верхним срезом опалубки верхней стенки.

После заливки с внешней стороны нижней стены насыпается опорный откос, а потому фактическое заглубление нижней стены будет равно глубине заложения верхней стены плюс высота, компенсирующая уклон.

Боковая стена рассматриваемого ленточного фундамента имеет ступенчатую конструкцию. Вся ее длина условно делится на участки примерно по 2 м. На каждом участке формируется горизонтальное дно траншеи. Отправная точка – заглубление верхней стены.

Строение боковой стены фундамента на склоне можно пояснить на примере. Например, строится дом шириной 6 м на склоне с уклоном 15 градусов. Условно выделяем 3 ступени боковой стены длиной по 2 м.

Ступеньки должны компенсировать уклон, причем подошва на каждой из них должна быть строго горизонтальна. Начальная точка расположена на верхней, а конечная – на нижней стене, где глубина заложения фундамента составляет 0,8 м.

Однако за счет уклона конечная точка располагается ниже верхней на 6хsin15=1,55 м. Высота каждой ступени составит 1,55:3=0,53 см.

Верхняя ступень в начальной точке будет иметь заглубление 0,8 м, а в конечной – 0,8-2sin15=0,28 м. Нижняя ступень: в конечной точке – 0,8 м, а в начальной – 0,8+sin15=1,32 м. Аналогичную величину имеет и средняя ступень.

Свод правил

Правила определения на какую глубину делать фундамент, установлены СП 50-101.2004. Они включают следующие основные требования:

1. Должна выбираться с учетом основных влияющих факторов (назначение сооружения, конструктивные особенности, геологические и гидрологические факторы, сезонное промерзание).
2. Глубина промерзания грунта принимается с учетом результатов наблюдения в период не менее 10 лет, как среднегодовое значение.
3. При отсутствии табличных данных по конкретному расчету проводится расчет с учетом нормативного промерзания определенного типа грунта.
4. Определяется отдельно для внешних и внутренних стен.
5. Корректируется с учетом коэффициента влияния эксплуатационных особенностей помещения.
6. Подошва заглубленного фундамента должна располагаться ниже глубины промерзания грунта, но выше уровня грунтовых вод. Минимальная глубина мелкозаглубленного фундамента устанавливается с учетом свойств грунта и учитывает глубину промерзания.
7. При проектировании фундамента должны предусматриваться водопонижающие (дренажные) мероприятия.
8. При возведении фундамента на склоне применяется ступенчатое заглубление, обеспечивающее формирование горизонтального основания пола.
9. Не стоит копать по принципу: чем глубже, тем прочнее и надежнее. Так можно просто бесполезно зарыть большие деньги в землю. Фундамент должен быть оптимальным для данного типа здания.

Правила проектирования уточняются и иными нормативными документами, указанными выше. Обязательно учитываются особенности разных типов основания.

Полезное видео

Как правильно рассчитать глубину заложения фундамента, подскажет видео:

Заключение

Правильная закладка фундамента определяет в дальнейшем надежность и долговечность всего сооружения. Ошибки при его строительстве очень трудно исправить, а потому при выборе глубины заложения необходимо учесть все установленные нормы и фактические воздействующие факторы. Оптимальная глубина позволяет обеспечить необходимое сочетание надежности здания и его себестоимость.

Рекомендации по охвату для анализа генотипов высокогетерологичных видов с использованием технологии секвенирования нового поколения

Технология секвенирования следующего поколения (NGS) — мощный и экономичный подход для крупномасштабного секвенирования ДНК ¹ . Появление на рынке технологий NGS изменило наше представление о научных подходах к генетическим и эволюционным исследованиям. Основное преимущество, предлагаемое NGS, — это возможность дешево производить огромный объем данных — в некоторых случаях более одного миллиарда коротких считываний за один прогон прибора.В настоящее время технологии NGS применяются ко все большему количеству немодельных животных и растений, в том числе. крупный рогатый скот ² , свиньи ^3,4 , рис ^5,6 , кукуруза ⁷ , соя ⁸ и огурец ⁹ , чтобы выявить генетическую основу экономических признаков, местной адаптации и эволюции экстремальные условия.

Для многих немодельных организмов существуют геномные ресурсы, которые могут обеспечить важную основу для применения технологии NGS.Посредством крупномасштабного секвенирования нетрудно получить данные короткого чтения NGS для этих организмов. Конвейеры анализа, которые имеют дело с этими данными NGS, включают в себя два этапа: отображение чтения и вызов генотипа. Программное обеспечение биоинформатики, связанное с этими двумя этапами, широко и полно используется. Большинство алгоритмов отображения чтения для данных NGS основаны либо на «хешировании», либо на эффективном алгоритме сжатия данных, называемом «преобразованием Барроуза – Уиллера» (BWT). Выравниватели на основе BWT включают в себя BWA ¹⁰ , Bowtie2 ¹¹ и SOAP2 ¹² , которые являются быстрыми, эффективными с точки зрения памяти и особенно полезны для выравнивания повторяющихся считываний.Вызов генотипа, анализ, следующий за картированием считывания, направлен на преобразование базовых вызовов и показателей качества в набор генотипов для каждого человека в выборке. Два широко используемых программного обеспечения для определения генотипа — это SAMtools ¹³ и GATK ¹⁴ .

В исследованиях с использованием технологий NGS наиболее важным соображением является получение сайтов однонуклеотидного полиморфизма (SNP) с точными генотипами. Для полногеномных ассоциаций или исследований QTL-картирования по экономическим признакам, в частности, точность генотипирования сайтов SNP имеет значительное влияние на полученные результаты.Если только небольшая часть сайтов SNP будет неправильно генотипирована, это может привести к совершенно другим выводам. Чтобы получить точные генотипы для каждого человека в выборке, возможным решением является более высокая глубина секвенирования покрытия для каждого человека. Для точного генотипирования, возможно, достаточно охвата в двадцать раз или даже больше. Однако для некоторых немодельных организмов секвенирование с более высоким охватом для большой популяции было бы дорогостоящим и не по средствам многих исследователей. Другой подход, секвенирование с низким охватом с помощью методов вменения генотипа, является возможным решением для популяционных исследований некоторых организмов.Этот метод очень успешно применялся в ассоциативных исследованиях людей ¹⁵ и риса ^5,6 . В частности, в ассоциативных исследованиях агрономических признаков риса исследователи использовали секвенирование генома с однократным охватом для каждого человека и kNN (алгоритм k-ближайшего соседа), основанный на методе вменения, для точного определения генотипов и проведения полногеномных ассоциативных исследований ⁵ .

Однако вышеупомянутые методы не были успешно применены к большой группе организмов с высокой степенью гетерозиготности и быстрым снижением неравновесия по сцеплению (LD).Это связано с тем, что по сравнению с секвенированием с низким уровнем охвата для инбредной линии риса, которую можно рассматривать как диплоид, очень трудно идентифицировать генотипы для гетерозиготных сайтов SNP с очень низким уровнем охвата считываний. Более того, методы определения генотипа, которые основаны на генотипах смежных сайтов SNP, могут быть проблематичными из-за ошибок типирования для гетерозиготных сайтов и неравновесия по более низкому сцеплению. Таким образом, генотипирование на основе более высокой глубины секвенирования важно для организмов, которые имеют высокую степень гетерозиготности и низкие значения LD.Соответственно, выбор подходящего покрытия для секвенирования является важным фактором при изучении таких организмов с использованием технологии NGS.

Тихоокеанская устрица, Crassostrea gigas , является морским двустворчатым моллюском, принадлежащим к типу Mollusca, который содержит наибольшее количество описанных видов морских животных. Устрицы — важные виды рыбного промысла и аквакультуры, а также модели для изучения нейробиологии, биоминерализации, закисления океана и адаптации к прибрежной среде в условиях изменения климата ^16,17 .Геном C. gigas , который был впервые опубликован в 2012 году, обеспечивает основной ресурс для генетических и эволюционных исследований ¹⁸ . C. gigas имеет скромный размер генома менее 500 миллионов пар оснований (Мбайт), короткое время генерации (1 год) и распространение по всему миру, что делает его подходящим модельным видом моллюсков. Кроме того, скорость полиморфизма для C. gigas составляет 1,3%, а неравновесие по сцеплению снижается до менее 0,2 примерно за 20 п.н., что составляет C.gigas подходящий репрезентативный организм с высоким разнообразием и быстрым распадом LD для исследования выбора охвата секвенированием ¹⁸ .

В этом исследовании мы использовали моделирование для изучения точности генотипирования как функции охвата последовательностей и других параметров фильтра на основе данных секвенирования NGS для C. gigas . Используя два разных конвейера вызова SNP, мы обнаружили, что покрытие в 15 раз подходит для анализа NGS, чтобы получить достаточное количество вызываемых SNP с высокой точностью.На основе наших результатов мы предоставляем рекомендации по выбору охвата секвенированием для применения NGS к организмам с высокой степенью гетерозиготности.

Глубина секвенирования и качество генотипа: точность и соображения по селекции для применения в геномной селекции автополиплоидных культур

Генетические материалы и фенотипирование

Двойная родительская популяция сладкого картофеля

Сладкий картофель имеет широкое генетическое разнообразие с точки зрения урожайности, питательности и кулинарных аспектов , толерантность к абиотическому стрессу, толерантность к биотическому стрессу, среди других атрибутов (Low et al.2017). Введение высокого содержания β-каротина в адаптированные к местным условиям сорта является основной целью селекции, особенно в странах Африки к югу от Сахары, где преобладает дефицит витамина А. Семейство полных сибсов из 315 потомков ( F ₁ ) было получено путем скрещивания выведенного в США сорта с высоким содержанием β-каротина, ‘Beauregard’, с адаптированным, предпочтительным для местных условий, крахмалистым старомодным с низким содержанием β-каротина. сорт «Танзания» в CIP — Перу. Эти два родителя отличаются дополнительными интересными чертами, и в дальнейшем популяция будет называться популяцией BT.В период с 2016 по 2017 год популяция оценивалась в шести средах Перу по различным характеристикам, связанным с качеством и урожайностью. Дизайн представлял собой α-решетку 80 × 4 с двумя-тремя повторениями, в зависимости от местоположения. Информация об этих испытаниях дополнительно описана в публикациях Gemenet et al. (2020) и Pereira et al. (2020), а также краткое изложение местоположений и экспериментальных проектов, прилагаемое в качестве Интернет-ресурса 1. Кроме того, телесный цвет оценивался в шести средах Уганды.Конструкция представляла собой α-решетку 80 × 4 с тремя повторениями на местоположение, на участке размером 4,8 м ² , с тремя местоположениями в течение двух лет, как далее описано Gemenet et al. (2020). Связанные с качеством признаки, измеренные в популяции BT, включают: содержание сухого вещества (DM), измеренное как процент от лабораторных высушенных образцов, деленный на исходную свежую массу 100 г; Содержание крахмала и β-каротина (BC), оцененное с помощью спектроскопии отражения в ближней инфракрасной области (NIRS), и содержание цвета кожи (FC), измеренное с использованием внутренних цветовых шкал, разработанных CIP и партнерами.Все характеристики, связанные с качеством, были измерены в Перу, но только телесный цвет измерялся в Уганде (FC_U). Данные дополнительно описаны в Gemenet et al. (2020). Для признаков, связанных с урожайностью, общее количество корней для хранения (TNR), количество корней для коммерческого хранения (NOCR), общий вес корней для хранения (RYTHA), вес корней для хранения (CYTHA) и общий вес листвы (FYTHA), были измерены только в шести экспериментах в Перу. Данные дополнительно описаны в Pereira et al. (2020). Аббревиатуры признаков дополнительно определены в таблице 1.

Таблица 1 Аббревиатуры признаков и их описание у сладкого картофеля и картофеля, использованные в текущем исследовании

Признаки, связанные с качеством, были проанализированы путем подбора следующей линейной смешанной модели в ASREML:

$$ y_ {ijkl} = \ mu + g_ {i} + e_ {l} + r_ {k \ left (l \ right)} + b_ {jk \ left (l \ right)} + (ge_ {i}) _ {l} + \ varepsilon_ {ijk \ left (l \ right)} $$

(1)

, где \ (y_ {ijkl} \) = вектор фенотипов генотипа i в блоке j в реплике k среды l , µ = среднее значение популяции, \ (g_ {i} \) = Фиксированный эффект обработки (генотип), \ (e_ {l} \) = случайный эффект окружающей среды l , \ (r_ {k \ left (l \ right)} \) = случайный эффект репликации k в среде l, \ (b_ {jk \ left (l \ right)} \) = случайный эффект блока j в реплике k среды l, \ ((ge_ {i}) _ {l} \) = случайный эффект генотипа i в среде l (l = 1 ,.{2}} \ right) \), \ (ge_ {i} \ sim N (0, \ left. \ Sum \ right) \) с ∑ = ковариационно-дисперсионная матрица генотипов по L = 5 среды, допускающие неоднородность генетических вариаций и ковариаций в разных средах. Наиболее подходящая модель была выбрана по информационному критерию Акаике (AIC) и несколько различалась по разным признакам. Для DM, Starch и FC_U использовалась факторно-аналитическая модель (Piepho, 1998) порядка 1, а для BC — факторно-аналитическая модель порядка 2, чтобы смоделировать ковариационную матрицу дисперсии.{2}} \ right) \) (Геменет и др., 2020).

Признаки, связанные с урожайностью, также анализировали с помощью линейных смешанных моделей, как описано Pereira et al. (2020) с использованием ограниченного максимального правдоподобия (REML) в GENSTAT 14 как:

$$ y_ {ijkl} = \ mu + g_ {i} + e_ {l} + r_ {k \ left (l \ right)} + b_ {jkl} + ge_ {il} + \ varepsilon_ {ijkl} $$

(2)

где \ (y_ {ijkl} \) = вектор фенотипов, как указано выше, \ (\ mu = \) среднее значение популяции, \ (g_ {i} = \) эффект фиксированного лечения (генотипа), \ (e_ { l} \) = фиксированный эффект среды l , \ (r_ {k \ left (l \ right)} \) = фиксированный эффект репликации k в среде l , \ (b_ {jkl} \) = Случайный эффект блока j в репликации k в среде l ; \ (b_ {jkl} \ sim N \ left ({0, \ sigma_ {b} ^ {2}} \ right) \), \ (ge_ {il} \) = фиксированный эффект взаимодействия генотипа i и окружающая среда l , а \ (\ varepsilon_ {ijkl} \ sim N \ left ({0, \ sigma ^ {2}} \ right) \) — случайная остаточная ошибка.Два класса данных (признаки, связанные с качеством и признаки, связанные с урожайностью) были проанализированы с использованием разных методов, поскольку два аналитика сделали разные предположения относительно компонентов дисперсии и взаимодействия генотипа с окружающей средой. Модели для признаков, связанных с урожайностью, предполагали сложную симметрию и фиксированную корреляцию между средами, что может быть менее реалистичным при оценке ковариационной структуры различных признаков. Это может привести к плохой оценке стандартных ошибок различий между некоторыми средними значениями и, следовательно, к некоторым различиям в скорректированных средних.Однако не ожидается, что такие различия существенно повлияют на результаты дальнейшего анализа с использованием этих скорректированных средних значений в текущем исследовании. Лучшие линейные несмещенные оценки (BLUE), полученные путем подгонки вышеуказанных моделей к экспериментальным данным с фиксированными генотипами, затем использовались для оценки GEBV.

Популяция сети наблюдения за признаками картофеля

Панель из 380 генотипов, состоящая из продвинутых клонов программы селекции картофеля и представляющая все селекционные популяции в CIP, была собрана для сети наблюдения за признаками (TON) в Перу, Китае и Эфиопии.В дальнейшем мы будем называть эту популяцию панелью TON. Оценка группы проводилась в различных агроэкологических зонах и в подмножествах генотипов в зависимости от партнерской способности участвующих NARS и / или способности производить достаточное количество мини-клубней для экспериментов. Экспериментальные участки, планы экспериментов и количество генотипов, оцениваемых за эксперимент, сведены в Таблицу 2. Панель TON оценивалась на предмет зрелости (набухания) по характеристикам клубней в три даты сбора урожая, когда средний урожай с растения (кг; AYP) и вес растения товарных клубней на растение (кг; WMT).Кроме того, вес зрелых клубней оценивали путем измерения общей массы клубней на растение (TTW; кг). В Перу TTW измеряли как средний общий вес клубней при трех обработках, связанных с засухой: терминальная засуха (орошение прекращалось во время цветения до сбора урожая; TTW16_TD), восстановление (частичное орошение после стресса засухи; TTW16_REC) и полное орошение (обычно орошение в течение всего периода). период роста; TTW16_NI), в то время как случайная засуха использовалась в Китае без контролируемых обработок. Устойчивость к вирусу Y картофеля (PVY) оценивалась после заражения вирулентными векторами и восприимчивыми рядами распространителей с использованием стандартных протоколов на CIP, в то время как устойчивость к фитофторозу (LB) оценивалась путем выращивания популяции в условиях эндемического заболевания и оценивалась с использованием стандартных протоколов на CIP.Аббревиатуры признаков определены в таблице 1.

Таблица 2 Расположение, дизайн и признаки, измеренные в панели сети наблюдения за признаками (TON) картофеля

В отличие от сладкого картофеля, где данные фенотипа и генотипа были сбалансированы в разных экспериментах, (292 + родители для DArTSeq и 315+ родителей для GBSpoly) эксперименты с картофелем были несбалансированными с точки зрения экспериментальных генотипов. Для целей этого исследования мы выбрали только места с наивысшим уровнем обучаемости по каждому признаку.Следовательно, мы использовали AYP из Куньмина (Китай; AYP_K), WMT из Куньмина (Китай; WMT_K), LB из Оксапампы (Перу; LB2014_O), LB из Юньнани (Китай; LB2016_Y), PVY из Лимы (Перу; PVY_L), TTW. усреднены по трем обработкам в 2016 г. в Ика (Перу; TTW16_Ica) и TTW в 2016 г. из Хэйлунцзяна (Китай; TTW16_HLJ), все из которых имели количество генотипов, указанное в таблице 2. Эксперименты были проанализированы как отдельные испытания, в зависимости от используемого экспериментального дизайна Обобщено в Таблице 2. Линейная смешанная модель, принимая во внимание соответствующий экспериментальный план, была адаптирована к фенотипическим данным.Для тех черт, которые подвергались различным методам лечения, например TTW в Перу, скорректированные средние значения для суставов были дополнительно получены для всех видов лечения путем подбора линейной смешанной модели. В этих смешанных моделях генотип рассматривался как фиксированный эффект, поэтому для каждого признака были получены значения BLUE для средних значений генотипа, которые использовались для прогнозирования GEBV.

Генотипирование и вызов вариантов

Полное 315 потомство популяции BT (сладкого картофеля) было генотипировано вместе с родителями с использованием оптимизированного протокола для гексаплоидного сладкого картофеля «GBSpoly» в Государственном университете Северной Каролины (NCSU).Кроме того, подвыборка из 292 потомков и два родителя популяции BT были генотипированы с помощью DArTSeq ™ в Австралии в рамках сотрудничества между платформой Integrated Genotyping Service and Support (IGSS) в центре Biosciences в Восточной и Центральной Африке (BecA) в Найроби, Кения и DArT. 380 генотипов популяции TON (картофель) были генотипированы GBS в Корнельском университете.

DArTSeq ™ для Sweetpotato

DArTseq ™ представляет собой комбинацию методов снижения сложности DArT и платформ секвенирования нового поколения (Kilian et al.2012; Куртуа и др. 2013; Raman et al. 2014; Cruz et al. 2013). Таким образом, DArTseq ™ представляет собой новую реализацию представлений с уменьшенной сложностью секвенирования (Altshuler et al. 2000) и более поздние применения этой концепции на платформах секвенирования следующего поколения (Baird et al. 2008; Elshire et al. 2011). Подобно предыдущим методам DArT, основанным на гибридизации массивов, технология оптимизирована для каждого организма и приложения путем выбора наиболее подходящего метода снижения сложности (как размера представления, так и доли генома, выбранной для анализов).Четыре метода снижения сложности были протестированы на сладком картофеле (данные не представлены), и был выбран метод PstI — MseI . Образцы ДНК обрабатывали в реакциях переваривания / лигирования в основном в соответствии с Kilian et al. (2012), но заменили один совместимый с PstI адаптер двумя разными адаптерами, соответствующими двум разным выступам рестрикционного фермента (RE). Адаптер, совместимый с PstI , был разработан для включения последовательности прикрепления проточной клетки Illumina, последовательности праймера и «ступенчатой» области штрих-кода переменной длины, аналогичной последовательности, описанной Elshire et al.(2011). Этот обратный адаптер содержал область прикрепления проточной кюветы и выступающую последовательность, совместимую с MseI . Только «смешанные фрагменты» ( PstI — MseI ) были эффективно амплифицированы в 30 раундах ПЦР с использованием следующих условий реакции: (i) 94 ° C в течение 1 мин, (ii) 30 циклов: 94 ° C в течение 20 минут. с, 58 ° C в течение 30 секунд, 72 ° C в течение 45 секунд и (iii) 72 ° C в течение 7 минут. После ПЦР эквимолярные количества продуктов амплификации из каждого образца 96-луночного микротитрационного планшета собирали и применяли в мостовой ПЦР c-Bot (Illumina) с последующим секвенированием на Illumina Hiseq 2000.Секвенирование (однократное считывание) было выполнено в течение 77 циклов. Последовательности, созданные для каждой дорожки, обрабатывались с использованием запатентованных аналитических конвейеров DArT. В первичном конвейере файлы FastQ сначала обрабатывались, чтобы отфильтровать некачественные последовательности, применяя более строгие критерии выбора к области штрих-кода по сравнению с остальной частью последовательности. Это было сделано для обеспечения надежности присвоения последовательностей конкретным образцам, переносимым на этапе «разделения штрих-кода». Приблизительно 2 000 000 последовательностей на штрих-код / ​​образец были идентифицированы и использованы для вызова маркеров.Наконец, идентичные последовательности были свернуты в «файлы fastqcoll». Файлы fastqcoll были «обработаны» с использованием собственного алгоритма DArT PL, который исправляет низкокачественную базу из одноэлементного тега в правильную базу с использованием свернутых тегов с несколькими элементами в качестве шаблона. «Подготовленные» файлы fastqcoll использовались во вторичном конвейере для проприетарных алгоритмов вызова SNP DArT PL и SilicoDArT (наличие / отсутствие ограничивающих фрагментов в представлении) (DArTsoft14). Для вызова SNP все теги из всех библиотек, включенных в анализ DArTsoft14, были кластеризованы с использованием алгоритма DArT PL C ++ на пороговом расстоянии 3 с последующим анализом кластеров на отдельные локусы SNP с использованием ряда технических параметров, особенно баланса счетчиков чтения для аллельных пар.К алгоритму были добавлены дополнительные критерии отбора на основе анализа примерно 1000 контролируемых перекрестных популяций. Тестирование ряда параметров подсчета тегов облегчило выбор истинных аллельных вариантов из паралогичных последовательностей. Кроме того, несколько образцов были обработаны от ДНК до аллельных вызовов в качестве технических реплик, и согласованность оценок использовалась в качестве основных критериев отбора для маркеров высокого качества / низкой частоты ошибок. Качество вызова обеспечивалось высокой средней глубиной чтения на локус (> 30X).SNP были закодированы как 0 = AA, 1 = BB, 2 = AB и «-» = отсутствует. Последовательности не были сопоставлены с эталонным геномом, потому что ко времени генотипирования диплоидные ссылки (Wu et al. 2018) не были опубликованы.

GBSPoly © для Sweetpotato

GBSpoly — это оптимизированный протокол для гексаплоидного сладкого картофеля, разработанный в NCSU в рамках проекта, направленного на разработку геномных инструментов для улучшения сладкого картофеля. ДНК проверяли на качество на 1% агарозном геле и количественно определяли на основе анализа на основе флуоресценции PicoGreen, и концентрацию нормализовали до 50 нг / мкл.Первоначально было проведено несколько попыток оптимизации пар рестрикционных ферментов (данные не показаны), и CviAII — TseI был выбран как лучшая комбинация для гексаплоидного сладкого картофеля. Следовательно, 1 мкг ДНК дважды расщепляли с использованием пяти единиц CviAII в течение трех часов при 25 ° C с последующим расщеплением TseI в течение еще трех часов при 65 ° C. Буфер CutSmart New England Biolabs (NEB) использовали для доведения общего объема до 30 мкл. Очистку расщепленных образцов проводили с использованием магнитных шариков AMPure XP от ThermoFisher ™ и количественно оценивали с помощью анализа PicoGreen.Штрих-коды были разработаны для учета ошибок замещения и удаления и имели буферную последовательность из 8 пар оснований, чтобы гарантировать, что штрих-код находится в пределах высококачественных базовых областей вызова при считывании последовательности. Дополнительные двойные переваривания объединенных образцов из 64 сплетений, стадии очистки и отбора по размеру выполняли, как описано Wadl et al. (2018) перед выполнением одностороннего секвенирования 125 п.н. в общей сложности на 40 дорожках секвенирования (по 8 дорожек для каждой из 5 библиотек) платформы Illumina HiSeq 2500. Полученные файлы FastQ были сопоставлены с эталонными геномами двух диких родственников сладкого картофеля, Ipomoea trifida и Ipomoea triloba (Wu et al.2018), а вызов вариантов выполняется с помощью конвейера GBSapp, как описано Wadl et al. (2018). SNP были закодированы в соответствии с дозировкой альтернативного аллеля как 0 = AAAAAA, 1 = AAAAAB, 2 = AAAABB, 3 = AAABBB, 4 = AABBBB, 5 = ABBBBB, 6 = BBBBBB. Процесс вызова вариантов кратко описан в Интернет-ресурсе 2.

GBSCornell для картофеля

Панель TON с 380 генотипом была генотипирована Корнельским университетом с использованием GBS в 2015 году. ДНК была расщеплена рестрикционным ферментом EcoT221 и библиотеками 48-сплетений были подготовлены к секвенированию с использованием индивидуальных протоколов GBS в Корнелле.Качество полученных файлов FastQ контролировалось, а вызов вариантов выполнялся с использованием опции GATK HaplotypeCaller (Poplin et al., 2017), отключением фильтра дублирования чтения (это рекомендуется для данных GBS) и использованием режима совместного генотипирования -ERC GVCF, как описано далее в Lindqvist-Kreuze et al. (2020). Считанные данные были сопоставлены с эталонным геномом картофеля, секвенированным из S. tuberosum группы Phureja, линия DM1-3 516 R44, удвоенный моноплоид (DM) через культивирование пыльников консорциумом по секвенированию генома картофеля (PGSC).Версия PGSC_DM_v4.03 эталонного генома использовалась при выравнивании. Штрих-коды были удалены с помощью стопок, а концы были обрезаны с помощью функции trim-galore с последующим сопоставлением с эталоном с помощью BWA. Результирующие файлы SAM обрабатывались с помощью samtools и вариантов, вызываемых с помощью вызывающего GATK Haplotype, нацеленного только на двуаллельные SNP. SNP были закодированы в соответствии с дозировкой альтернативного аллеля как 0 = AAAA, 1 = AAAB, 2 = AABB, 3 = ABBB и 4 = BBBB. Фильтрация SNP выполнялась с помощью bcftools, допускающей только те SNP с MAF ≥ 3%, частотой вызовов ≥ 70%, средним качеством генотипа (GQ) ≥ 30 и минимальной глубиной чтения (DP) ≥ 16 (Lindqvist-Kreuze et al.2020).

Хотя оценка частот аллелей в полиплоидах может столкнуться со многими проблемами, как объяснил De Silva et al. (2005), частоты аллелей для полиплоидных данных («GBSpoly» для сладкого картофеля и «GBSCornell» для картофеля) в текущем исследовании оценивались путем подсчета количества аллелей в каждом генотипе на основе дозировки, поскольку для обоих методов использовалось количественное генотипирование. .

Сравнение моделей для прогнозирования

Мы использовали пакет AGHmatrix (Amadeu et al.2016) для разработки G-матриц родства, разделяющих генетические вариации на основе нескольких моделей действия генов. Для маркеров DArTSeq популяции BT (сладкий картофель), где у нас не было информации о дозировке, мы разработали аддитивную G-матрицу в соответствии с VanRaden (2008), называемую здесь Add_2x_DArTseq, и G-матрицу без аддитивных эффектов по Vitezica et al. al. (2013), именуемое в данном документе NonAdd_2x_DArTSeq. Для данных GBSpoly (сладкий картофель) и TON популяции GBSCornell (картофель), где у нас была информация о дозировках, мы использовали три модели для разработки G-матриц: (i) моделирование только аддитивных эффектов, согласно VanRaden (2008), о которых здесь говорится: как Add_6x_GBSpoly для сладкого картофеля и Add_4x_GBSCornell для картофеля, (ii) моделирующая добавка плюс неаддитивные эффекты, согласно Slater et al. {2}} \ right)}} $$

(4)

Кроме того, мы рассчитали предполагаемую скорость генетического выигрыша от геномной селекции для каждой аддитивной модели с или без дозировки для каждого признака в соответствии с Oliveira et al.(2019) как:

$$ \ Delta GG = \ frac {{\ left ({i * \ sigma_ {a} * PA} \ right)}} {L} $$

(5)

где \ (\ Delta GG = \) коэффициент генетического прироста, \ (i = \) интенсивность отбора, \ (\ sigma_ {a} = \) квадратный корень из аддитивной генетической изменчивости, \ (PA = \) предсказательная способность и \ (L = \) продолжительность цикла разведения, предполагая, что L = 5 для сладкого картофеля в соответствии с применяемой в настоящее время ускоренной схемой разведения (Mwanga et al.2017), и L = 8 для картофеля.

Сколько маркеров подходит для предсказания?

Для популяции сладкого картофеля F ₁ мы использовали исходные данные GBSpoly, используя разные критерии фильтрации, чтобы получить разное количество маркеров. Мы использовали три критерия (i) общее количество SNP, отфильтрованных при MAF 10% и скорости вызовов ≥ 90%, (ii) общее количество SNP, отфильтрованных при MAF 30% и скорости вызовов ≥ 90% (использованных в приведенных выше анализах) и ( iii) случайная выборка из 15 000 SNP из общего числа SNP, отфильтрованная при 30% MAF и ≥ 90% скорости вызова.В картофеле общее количество SNP было отфильтровано с использованием двух критериев: (i) 30% MAF и ≥ 90% частота вызовов, (ii) 40% MAF и ≥ 90% частота вызовов. Прогнозы были выполнены для всех признаков, измеренных с использованием этих критериев. Чтобы отделить влияние частоты аллелей от влияния количества маркеров на PA, мы также использовали исходные данные GBSpoly по сладкому картофелю, отфильтровали при постоянном MAF и произвольно выбрали разное количество маркеров, которые мы использовали для сравнения PA в одном, связанном с качеством. простой признак (β-каротин; BC) и один сложный признак, связанный с урожайностью (общее количество корней хранения; RYTHA).Мы использовали 10, 000, 5000, 1000 и 500 SNP, все отфильтрованы до MAF ≥ 5%. Модель, учитывающая только аддитивные эффекты (Add_6x_GBSpoly), использовалась для сравнения влияния частоты аллелей и количества маркеров на сладкий картофель, в то время как все три модели были протестированы между двумя критериями фильтрации на картофеле.

Включение haplotypic-QTL в модели прогнозирования сладкого картофеля

Воспользовавшись преимуществами полностью поэтапной интегрированной карты сцепления от BT (Mollinari et al. 2020), мы проверили прогностическую способность моделей с использованием QTL.Для этого мы использовали ту же схему перекрестной проверки, что и выше, где 80%: 20% случайных выборок использовались в качестве обучающей и тестовой совокупностей, соответственно, повторенных 1000 раз. Чтобы обнаружить QTL, мы выполнили наше отображение множественных интервалов со случайным эффектом (REMIM) с использованием последовательного прямого поиска (Pereira et al.2020). Используя последовательный прямой поиск, мы использовали статистику оценок для проверки позиций на карте каждые 2 сантиметра (сМ) и добавили QTL к модели случайного эффекта, по одному QTL за раз, используя ослабленный порог уровня значимости для всего генома (α = 0.20). Размер окна 20 см использовался, чтобы избежать выбора другой позиции, очень близкой к QTL уже в модели. Для моделей G-BLUP реализованные матрицы родства были основаны на информации о гаплотипах от маркеров, расположенных каждые 2 сМ на генетической карте. Для QTL-BLUP (Q-BLUP) реализованные матрицы родства были основаны на гаплотипах из маркера QTL-пика; если было более одного QTL, их матрицы родства усреднялись; если не было QTL, мы получали прогноз, как в G-BLUP. Для моделей Q + G-BLUP были подобраны два термина, каждый с реализованными матрицами родства на основе маркеров пика QTL (как для Q-BLUP) и оставшихся маркеров в карте сцепления, кроме тех, которые выбраны как QTL.

Высокоточный вариант Neisseria gonorrhoeae и определение устойчивости к противомикробным препаратам из метагеномного секвенирования нанопор

% PDF-1.4
%
198 0 объект
>
эндобдж
197 0 объект
> поток
Acrobat Distiller 8.1.0 (Windows) Arbortext Advanced Print Publisher 10.0.1465 / W Unicode2021-04-05T23: 01: 07-07: 002020-09-01T13: 48: 45 + 05: 302021-04-05T23: 01: 07 -07: 00application / pdf

uuid: d4886a53-1dd1-11b2-0a00-f808275d6100uuid: d4886a56-1dd1-11b2-0a00-aa0000000000
конечный поток
эндобдж
196 0 объект
>
эндобдж
3 0 obj
>
эндобдж
200 0 объект
>
эндобдж
201 0 объект
>
эндобдж
39 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >>
эндобдж
40 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
41 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
42 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
43 0 объект
> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
202 0 объект
> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >>
эндобдж
222 0 объект
[228 0 R 229 0 R 230 0 R 231 0 R 232 0 R 233 0 R 234 0 R]
эндобдж
223 0 объект
> поток
q
300 0 0 75 164 679 см
/ Im0 Do
Q
BT
/ T1_0 1 Тс
10 0 0 10 344.36975 580.99982 тм
() Tj
0 0 1 рг
-10.34099 0 Тд
(10.1101 / гр.262865.120) Tj
0 г
-16.89599 0 Тд
(Доступ к самой последней версии на сайте doi 🙂 Tj
6,447 1 тд
(опубликовано онлайн 1 сентября 2020 г.) Tj
/ T1_1 1 Тс
-6,447 0 Тд
(Genome Res. \ 240) Tj
/ T1_0 1 Тс
0 1.00001 TD
(\ 240) Tj
0 1 ТД
(Николас Д. Сандерсон, Джереми Суонн, Линн Баркер и др.) Tj
Т *
(\ 240) Tj
/ T1_2 1 Тс
15 0 0 15 72 630,99997 тм
(определение сопротивления из метагеномного секвенирования нанопор) Tj
18.06095 1 тд
(вариант и противомикробный) Tj
/ T1_3 1 Тс
-10.83698 0 Тд
(Neisseria gonorrhoeae) Tj
/ T1_2 1 Тс
-7.22397 0 Тд
(Высокая точность) Tj
ET
72 569 кв.м.
556 569 л
0 0 мес.
S
BT
ET
BT
/ T1_0 1 Тс
11 0 0 11 156,942 523,99994 тм
(\ 240) Tj
/ T1_2 1 Тс
-3,50099 1 тд
(Материал) Tj
-2,77799 1,00001 тд
(Дополнение) Tj
ET
BT
/ T1_0 1 Тс
10 0 0 10 177 536,99997 тм
(\ 240) Tj
32.62186 1 тд
() Tj
0 0 1 рг
/ T1_2 1 Тс
-32.62186 0 Тд
(http://genome.cshlp.org/content/suppl/2020/09/01/gr.262865.120.DC1)Tj
ET
BT
0 г
/ T1_0 1 Тс
11 0 0 11 156,942 497,99997 тм
(\ 240) Tj
/ T1_2 1 Тс
-1.dhsad: n0IpT {7 [߿?

генов | Бесплатный полнотекстовый | Ассоциативное картирование признаков семян пажитника с высокой плотностью на основе SNP выявляет гомологию с Clover

Поиск BLASTn по базе данных NR в NCBI с использованием последовательностей трех контигов (таблица S3) показал значительную гомологию между контигом dDocent_Contig_466, на котором SNP dDocent_Contig_466_145 была нанесена на карту, и геномные последовательности из Medicago truncatula и Trifollium spp. Аналогичным образом было обнаружено, что contig dDocent_Contig_84790, который содержит SNP dDocent_Contig_84790_24, имеет гомологичные последовательности у тех же двух видов.Напротив, совпадений BLAST не было обнаружено для второго контига, dDocent_Contig_39741, содержащего SNP dDocent_Contig_39741_151. Идентифицированные последовательности с наибольшим совпадением из M. truncatula и Trifolium впоследствии были подвергнуты шестикадровой трансляции с последующим поиском существующих концептуальных ORF. Удивительно, но оба SNP пажитника, dDocent_Contig_466_145 и dDocent_Contig_84790_24, были сопоставлены с открытыми рамками считывания у M. truncatula и Trifollium. Поиск домена с помощью инструмента SMART идентифицировал домен GAG ретротранспозона, где SNP dDocent_Contig_466_145 был выровнен на C-конце этого домена в обоих верхних совпадениях последовательностей от M.truncatula и Trifolium spp. (Таблица S3). Домен GAG (Pfam: PF03732) является относительно консервативным доменом, обнаруженным в нескольких ретротранспозонах с концевыми повторами, известных как TR-GAG [42]. Аналогичным образом, SNP dDocent_Contig_84790_24 был выровнен непосредственно после ретровирусного домена интегразы (Pfam: PF00665), который является обычным каталитическим доменом в ретротранспозонах «цыганского» типа. Поскольку известно, что мобильные элементы (TE) TR-GAG активно транскрибируются [42], мы исследовали, транскрибируются ли также идентифицированные гены TE, в которых расположены SNP.Использование данных RNAseq пажитника из базы данных SRA привело к идентификации транскриптов, имеющих увеличенную длину последовательности и высокую гомологию с контигами, соответствующими трем значимым SNP, таким образом, также для dDocent_Contig_39741_151, для которого в базе данных NR не было обнаружено совпадений. Однако для этого контига соответствующий транскрипт показал более низкую степень гомологии последовательностей, чем та, которая наблюдалась для предыдущих контигов с их транскриптами (Таблица S3). Трансляция транскрипта TRINITY_DN2712_c0_g1_i2, соответствующего dDocent_Contig_466, подтвердила присутствие домена TE, GAG и идентифицировала другой ДНК-связывающий домен Zinc Finger типа C2HC (ZnF-C2HC, Pfam: PF01530) ниже домена GAG.Трансляция транскрипта TRINITY_DN59603_c0_g1_i1, соответствующего contig dDocent_Contig_39741, идентифицирует, немного ниже порогового значения, один длинный спиральный домен, в котором обнаружен домен лейциновой молнии, связанный с Homeobox (HALZ, pfam: PF02183). Наконец, трансляция транскрипта TRINITY_DN26743_c0_g1_i1, который был идентифицирован для dDocent_Contig_84790_24, подтверждает присутствие ретровирусного домена интегразы и идентифицирует расположенный ниже по течению домен с короткой спиральной спиралью.

% PDF-1.5
%
1 0 obj
>
>>
эндобдж
4 0 obj

/ CreationDate (D: 20190911100313 + 01’00 ‘)
/ ModDate (D: 20190911100313 + 01’00 ‘)
/Режиссер
>>
эндобдж
2 0 obj
>
эндобдж
3 0 obj
>
эндобдж
5 0 obj
>
/ XObject>
>>
/ Аннотации [58 0 R 59 0 R 60 0 R 61 0 R 62 0 R]
/ Родитель 2 0 R
/ MediaBox [0 0 595 842]
>>
эндобдж
6 0 obj
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [70 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 71 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 0
>>
эндобдж
7 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 73 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 2
>>
эндобдж
8 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 74 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 3
>>
эндобдж
9 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [75 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 76 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 4
>>
эндобдж
10 0 obj
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 78 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 6
>>
эндобдж
11 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [79 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 80 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 7
>>
эндобдж
12 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [81 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 82 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 9
>>
эндобдж
13 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 83 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 11
>>
эндобдж
14 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [85 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 86 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 12
>>
эндобдж
15 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 87 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 14
>>
эндобдж
16 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 88 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 15
>>
эндобдж
17 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 89 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 16
>>
эндобдж
18 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 90 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 17
>>
эндобдж
19 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [91 0 R]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 92 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 18
>>
эндобдж
20 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 93 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 20
>>
эндобдж
21 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 94 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 21
>>
эндобдж
22 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 95 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 22
>>
эндобдж
23 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 96 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 23
>>
эндобдж
24 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 97 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 24
>>
эндобдж
25 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 98 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 25
>>
эндобдж
26 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 99 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 26
>>
эндобдж
27 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 100 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 27
>>
эндобдж
28 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 101 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 28
>>
эндобдж
29 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 102 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 29
>>
эндобдж
30 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 103 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 30
>>
эндобдж
31 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 104 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 31
>>
эндобдж
32 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 105 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 32
>>
эндобдж
33 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 107 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 33
>>
эндобдж
34 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 108 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 34
>>
эндобдж
35 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 109 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 35
>>
эндобдж
36 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 110 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 36
>>
эндобдж
37 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 111 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 37
>>
эндобдж
38 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 113 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 38
>>
эндобдж
39 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 114 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 39
>>
эндобдж
40 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 115 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 40
>>
эндобдж
41 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 116 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 41
>>
эндобдж
42 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ Аннотации [117 0 118 0 ₽ 119 0 120 0 ₽]
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 121 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 42
>>
эндобдж
43 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 122 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 47
>>
эндобдж
44 0 объект
>
/ ExtGState>
/ XObject>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 125 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 48
>>
эндобдж
45 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 792 612]
/ Содержание 126 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 49
>>
эндобдж
46 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 792 612]
/ Содержание 127 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 50
>>
эндобдж
47 0 объект
>
/ ExtGState>
/ XObject>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 131 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 51
>>
эндобдж
48 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 132 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 52
>>
эндобдж
49 0 объект
>
/ ExtGState>
/ ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI]
>>
/ MediaBox [0 0 612 792]
/ Содержание 133 0 руб.
/ Группа>
/ Вкладки / S
/ StructParents 53
>>
эндобдж
50 0 объект
>
эндобдж
51 0 объект
>
эндобдж
52 0 объект
>
эндобдж
53 0 объект
>
транслировать
xVn6} WSw ز $ + Nҽ! f @ (привет $ HC; PIH & y̙9 # ^ ~ Q $ |} n = ELoz ~ | D 隶 = I7 | goazQ>? ב \ Qo \ 91U {@ i2A & Y / KO6! J! cJ3 饻 et.09DJ а | 7? $ J
75R # o + s $ 1g1 ឋ g0VtLw

Электронные измерения однонуклеотидных полиморфизмов без амплификации ДНК

Эта публикация Nature Biomedical Engineering демонстрирует, что новые транзисторы Cardea с питанием от CRISPR, получившие название «SNP-Chip», могут позволить новое поколение генетических тестов, которые демократизируют генетику, устраняя необходимость в лаборатории.

Cardea Bio, компания Tech + Bio, интегрирующая молекулярную биологию с полупроводниковой электроникой с помощью кардовых транзисторов с биологическим закрытием на основе графена, объявила сегодня, что ее главный научный сотрудник д-р.Киана Аран и соавторы опубликовали статью под названием «Дискриминация одноточечных мутаций в неамплифицированной геномной ДНК с помощью Cas9, иммобилизованного на графеновом полевом транзисторе» в журнале Nature Biomedical Engineering 5 апреля ^-го -го 2021 года в журнале «». версия Cardean CRISPR-Chip, называемая SNP-Chip, которая может быстро обнаруживать и количественно определять однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) или точечные мутации в неамплифицированной геномной ДНК, и демонстрирует потенциал платформы для оптимизации генетического тестирования в диагностических и исследовательских целях.

SNP-Chip — это система с питанием от CRISPR, работающая на транзисторах Cardean. Он использует естественные возможности поиска CRISPR с помощью перепрограммируемых гРНК и ортологов ферментов CAS для обнаружения целевых SNP и быстрого вывода результатов на экран. В отличие от других методов генетических тестов, таких как ПЦР и секвенирование, которые требуют гораздо больше времени и хорошо оснащенной лаборатории с высококвалифицированным техническим персоналом для выполнения сложных процессов подготовки и измерения образцов, для SNP-Chip требуется только минимально обработанный образец (например,г., из крови, слюны или растительного материала), на работу. Таким образом, SNP-Chip является первым методом обнаружения SNP, который не страдает от проблем и узких мест, вызванных амплификацией ДНК, а также не требует дорогостоящих оптических инструментов обнаружения.

В статье авторы подтвердили полезность SNP-Chip для тестирования SNP, связанных с двумя генетическими заболеваниями человека: серповидно-клеточной анемией и боковым амиотрофическим склерозом (БАС). В обеих клинических моделях SNP-Chip был способен различать гомозиготные образцы, содержащие две копии здорового SNP исвязанный с заболеванием SNP. Он также смог обнаружить гетерозиготность, которая дает часто скрытый потенциал передачи генетического заболевания.

История продолжается

«Цифровой, прямой, быстрый и точный анализ SNP произведет революцию в скрининге генетических мутаций», — сказала Ирина Конбой, доктор философии, профессор биоинженерии Калифорнийского университета в Беркли и соавтор статьи. «Эта новая технология будет способствовать открытию процессов, лежащих в основе болезней и старения, и обеспечит более быстрый и эффективный клинический перевод», — заключил профессор Конбой.

Фактически, SNP-Chip обеспечивает простой и удобный электронный скрининг широкого спектра генетически обусловленных проблем со здоровьем, поскольку SNP составляют 50 процентов мутаций, которые, как известно, вызывают генетические заболевания. В статье показано, что перепрограммирование SNP-Chip для идентификации различных маркеров заболевания является простым процессом: авторы просто разработали различные направляющие РНК для связывания с SNP, специфичными для серповидно-клеточной анемии и БАС. Они сообщили, что практически любое генетическое заболевание может быть обнаружено с помощью SNP-чипа, если для поиска цели может быть разработана управляющая РНК.Кроме того, SNP-чип не ограничивается только диагностикой человека, но также может использоваться для обнаружения SNP в любом интересующем генетическом материале для широкого спектра приложений, таких как генотипирование для мониторинга сельского хозяйства и окружающей среды.

«Объединение разнообразия биологии CRISPR-Cas с электроникой с помощью кардовых транзисторов открывает совершенно новый диапазон возможностей для диагностических и исследовательских приложений», — сказал пионер CRISPR Вирджинюс Сикснис, основатель и председатель CasZyme, профессор Вильнюсского университета, член Советник Cardea по инновациям и соавтор статьи.«Использование ортолога Cas9 для обнаружения SNP — это лишь верхушка айсберга возможностей».

Тестирование SNP обычно выполняется на больших неподвижных лабораторных приборах с использованием сложных рабочих процессов, получение результатов которых может занять часы или дни. Напротив, Cardean Transistors ™, такие как те, на которых работает SNP-Chip, являются первым примером диагностических устройств на стыке биологии и электроники на основе наноматериалов. Они закладывают основу для следующего поколения высокоточных сенсорных устройств, работающих в режиме, близком к реальному времени, с такими практическими характеристиками, как небольшой размер, что делает их пригодными для встраивания в портативные устройства; возможность прямого подключения к Интернету для анализа; и возможность предоставлять результаты почти в реальном времени на месте оказания медицинской помощи.

«Способность обнаруживать SNP на чипе не только затрагивает суть генетики здоровья человека, но также дает нам ценную и действенную информацию о таких областях, как сельское хозяйство, промышленные биопроцессы и даже эволюционные изменения, такие как мутации, вызывающие устойчивость антибиотики или мутирующие вирусы », — сказал д-р Аран. «Устраняя необходимость в амплификации и больших оптических инструментах, SNP-Chip сделает генотипирование SNP для этих целей легкодоступным. Мы надеемся, что эта статья вдохновит ученых всего мира на изучение способности SNP-Chip обнаруживать генетические вариации»

Публикация был результатом сотрудничества между Cardea Bio, Inc., Институт Кека, Калифорнийский университет в Беркли и Калифорнийский университет в Ирвине, а также CasZyme и Вильнюсский университет, Литва, оба через профессора Вирджиньюса Сиксниса.

«Мы гордимся тем, что работали с такой талантливой группой новаторов и ученых над созданием технологии, которая представляет собой важную веху в изменении методов обнаружения на основе нуклеиновых кислот», — сказал д-р Аран.

SNP-Chip — это версия продукта технологии CRISPR-Chip ™, о которой ранее сообщалось Cardea, которая способна обнаруживать крупные вставки и делеции нуклеиновых кислот и была представлена ​​на обложке Nature Biomedical Engineering в июне 2019 года.Многоуровневые новые технологии, использованные в публикации, были разработаны Cardea Bio. Чтобы узнать больше, посетите www.cardeabio.com.

О журнале Nature Biomedical Engineering

Nature Biomedical Engineering — ведущий академический журнал, публикующий оригинальные исследования, обзоры и комментарии, имеющие большое значение для сообщества биомедицинской инженерии. Журнал посвящен исследованиям, охватывающим науку о жизни, физику и инженерные науки, с целью повышения наглядности материалов, методов лечения и устройств, которые улучшают понимание болезней и способствуют улучшению здоровья человека или здравоохранения.

О компании Cardea Bio

Cardea подключает компьютеры к ЖИВЫМ молекулярным сигналам, управляющим биологией. Его мультикомная технология состоит из Tech + Bio Infrastructure (оборудование, программное обеспечение, программное обеспечение) и наборов микросхем Cardean, изготовленных с использованием запатентованных транзисторов с биологическим закрытием на основе графена, или сокращенно Cardean Transistors ™.

Cardean Transistors ™ использует графен, наноматериал, который является биосовместимым и почти идеальным полупроводником из-за того, что его толщина составляет всего один атом, в отличие от гораздо более медленного полупроводникового материала кремния.Таким образом, Cardea получает разрешение сигнала, достаточное для прослушивания молекулярных сигналов в реальном времени, и таким образом заменяет оптические и статические измерения интерактивными потоками в реальном времени анализа сигналов multi-omics.

Cardea выполняет долгосрочную миссию, которую они называют «Связь с жизнью», чтобы предоставить своим партнерам «Powered by Cardea» решения Tech + Bio, которые позволят им оказать значительное положительное влияние на мир с помощью инновационных приложений, которые Связь с жизнью. Для получения дополнительной информации о Cardea Bio Inc.посетите www.cardeabio.com

См. исходную версию на businesswire.com: https://www.businesswire.com/news/home/20210405005342/en/

Контакты

Связи с инвесторами и запросы СМИ
Роб Лозук
Главный коммерческий директор
[email protected]

Электронные измерения полиморфизмов одиночных нуклеотидов без амплификации ДНК

GlobeNewswire

Предложение объявлено безусловным во всех отношениях и исключено из листинга

НЕ ДЛЯ ВЫПУСКА, ПУБЛИКАЦИИ ИЛИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ, В ЧАСТИ , В ЛЮБУЮ ЮРИСДИКЦИЮ ИЛИ ИЗ ЛЮБОЙ ЮРИСДИКЦИИ, ГДЕ СДЕЛАТЬ, ЭТО БЫЛО СОСТАВЛЯЕТ НАРУШЕНИЕ СООТВЕТСТВУЮЩИХ ЗАКОНОВ ТАКОЙ ЮРИСДИКЦИИ ПО НЕМЕДЛЕННОМУ ВЫПУСКУ 6 АПРЕЛЯ 2021 ГОДА РЕКОМЕНДУЕМОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ НАЛИЧНЫМИ ДЛЯ G4S PLC компанией ATLAS UK BIDCOied LIMITED (недавно зарегистрированная компания Alliance UK) ) ПРЕДЛОЖЕНИЕ ОБЪЯВЛЕНО БЕЗОПАСНО ВО ВСЕХ ОТНОШЕНИЯХ И УДАЛЕНИЕ 1.Введение 8 декабря 2020 года советы директоров, управляющие Allied Universal Topco LLC («Allied Universal») и G4S plc («G4S» или «Компания») объявили, что они достигли соглашения об условиях рекомендуемого денежного предложения, чтобы должна быть сделана Atlas UK Bidco Limited («Allied Bidco»), недавно зарегистрированной компанией, которая косвенно контролируется Allied Universal, для приобретения всего выпущенного и подлежащего выпуску акционерного капитала G4S («Предложение»). Полные условия и условия Оферты и процедуры акцепта были изложены в документе о предложении от 5 января 2021 года («Документ о предложении»), а в отношении Акций G4S, хранящихся в документарной форме, — в Форме акцепта.16 марта 2021 года Allied Bidco объявила, что предложение стало безоговорочным в отношении принятия. Allied Bidco рада сообщить, что все Условия ее Предложения для G4S были выполнены или отменены, и, соответственно, Предложение теперь является безусловным во всех отношениях. Стив Джонс, президент и главный исполнительный директор Allied Universal, сказал: «Я взволнован тем, что может дать эта уникальная и убедительная комбинация. Я рад приветствовать Эшли Алманза и высшее руководство G4S в Allied Universal.Я с нетерпением жду совместной работы, чтобы обеспечить беспрепятственную интеграцию и создать бизнес, который сможет лучше обслуживать своих клиентов, создавать новые возможности для своих сотрудников и возглавлять отрасль для следующего поколения ». Эшли Алманза, генеральный директор G4S, сказала: «Я хотела бы поблагодарить коллег из G4S по всему миру за их значительный коллективный вклад в успешную реструктуризацию и репозиционирование G4S, что позволило объединить две лучшие компании в мире. индустрия безопасности.Это дало отличный результат для сотрудников, клиентов и всех наших ключевых заинтересованных сторон. Моя команда и я с нетерпением ждем возможности сотрудничества с Allied Universal для поддержки успешной интеграции этих двух предприятий ». 2. Уровень принятия По состоянию на 13:00. (Время по лондонскому времени) 1 апреля 2021 года (что является наиболее поздней возможной датой до публикации этого объявления) Allied Bidco получила действительные акцепты Предложения в отношении в общей сложности 1 369 378 282 Акций G4S, что составляет примерно 88.25 процентов. существующего выпущенного обыкновенного акционерного капитала G4S. 3. Исключение из листинга, отмена торгов и перерегистрация Поскольку Предложение теперь является безусловным во всех отношениях, и Allied Bidco, приняв предложение, приобрела или согласилась приобрести выпущенный акционерный капитал, составляющий более 75 процентов. права голоса G4S, Allied Bidco теперь обеспечит подачу G4S заявок на отмену включения акций G4S в Официальный список, отмену торгов акциями G4S на основном рынке ценных бумаг Лондонской фондовой биржи и перерегистрацию G4S. как частная компания с ограниченной ответственностью.Ожидается, что отмена листинга акций G4S в Официальном списке и торговли акциями G4S на основном рынке ценных бумаг Лондонской фондовой биржи вступит в силу не ранее 5 мая 2021 года. Как можно скорее после делистинга и отмены торговли, предполагается, что G4S будет перерегистрирована как частная компания согласно соответствующим положениям Закона. 19 марта 2021 года Nasdaq Copenhagen A / S («Nasdaq») одобрила исключение из торговли долей G4S VP из Nasdaq и официального листинга.Последний день торгов на Nasdaq — 16 апреля 2021 года. Делистинг Акций G4S и перерегистрация G4S в качестве частной компании с ограниченной ответственностью значительно снизит ликвидность и ликвидность любых Акций G4S, в отношении которых не было предложено будут приняты в то время, и требования к отчетности и раскрытию информации будут значительно сокращены. Любые оставшиеся акционеры G4S станут миноритарными акционерами частной компании с ограниченной ответственностью, контролируемой контрольным пакетом акций, и, следовательно, могут быть не в состоянии продать свои акции G4S.Нет уверенности в том, что G4S будет выплачивать какие-либо дополнительные дивиденды или другие распределения или что таким миноритарным акционерам G4S снова будет предложена возможность продать свои акции G4S на условиях, которые эквивалентны или не менее выгодны, чем те, которые предусмотрены в Предложении. 4. Обязательное приобретение Как указано в параграфе 18 Части II Документа о предложении, если Allied Bidco получает акцепты в соответствии с Предложением в отношении и / или иным образом приобретает оба 90%. или более по стоимости Акций G4S, к которым относится Предложение, и 90 процентов.или более прав голоса, принадлежащих этим акциям, Allied Bidco намеревается реализовать свои права в соответствии с разделами 974–991 Закона, чтобы в принудительном порядке приобрести оставшиеся Акции G4S на тех же условиях, что и Предложение. 5. Продолжение Оферты и действия, которые необходимо предпринять. Оферта будет открыта для принятия до дальнейшего уведомления. Уведомление будет сделано не менее чем за 14 дней до закрытия Предложения. Акционерам G4S, которые еще не приняли Предложение, настоятельно рекомендуется сделать это как можно скорее в соответствии со следующими процедурами: Если вы держите свои Акции G4S в сертифицированной форме (то есть не в CREST), вы должны заполнить и вернуть форму. акцепта, сопровождающего Документ о предложении, в кратчайшие сроки.Если вы держите свои Акции G4S в бездокументарной форме (то есть в системе CREST), вы должны убедиться, что вы или от вашего имени совершили Электронный акцепт и чтобы инструкция TTE была исполнена как можно скорее. Если вы держите свои акции G4S как спонсируемый член CREST, вам следует связаться со своим спонсором CREST, поскольку только ваш спонсор CREST сможет отправить необходимые инструкции TTE в Euroclear. Держатели ADR G4S, желающие участвовать в Предложении, должны связаться со своим Депозитарием. Держатели G4S VP, желающие принять участие в Предложении, должны связаться с Danske Bank.Полная информация о том, как принять Предложение, изложена в параграфе 16 Части II и Частях D и E Приложения 1 Документа о предложении. Если у вас есть какие-либо вопросы о Предложении или вы сомневаетесь в том, как заполнить Форму акцепта (если ваши Акции G4S хранятся в сертифицированной форме), пожалуйста, свяжитесь с Link Group по телефону 0371664 0321 (если звоните в пределах Великобритании) или на +44 371 664 0321 (при звонке из-за пределов Великобритании). Звонки из-за пределов Великобритании оплачиваются по действующему международному тарифу.Телефон доверия открыт с 9.00 до 17.30 с понедельника по пятницу, кроме государственных праздников в Англии и Уэльсе. Обратите внимание, что Link Group не может предоставлять какие-либо финансовые, юридические или налоговые консультации, а звонки могут записываться и контролироваться в целях безопасности и обучения. 6. Урегулирование Урегулирование компенсации, на которую любой акцептирующий акционер G4S имеет право в соответствии с Предложением, будет осуществляться путем выпуска чеков или платежей CREST следующим образом: (i) в случае принятия, которые были получены, являются действительными и полными во всем соблюдает дату или до даты этого объявления, в течение 14 дней с даты этого объявления; или (ii) в случае дальнейших приемов, в течение 14 дней с даты получения подтверждения, которое является действительным и полным во всех отношениях .7. Прочее. Если контекст не требует иного, за исключением случаев, указанных в данном объявлении, определения и правила толкования, используемые в Документе предложения, также применяются в этом объявлении. Процентная доля акций G4S, указанная в этом объявлении, основана на цифре в 1551 594 436 выпущенных акций G4S на момент закрытия торгов в Лондоне 1 апреля 2021 года, что является самой последней возможной датой до публикации этого объявления. Копия этого объявления будет размещена на веб-сайте Allied Bidco www.securityservicesthereforyou.com и на сайте G4S по адресу www.g4s.com/investors/offers. Во избежание сомнений, содержание веб-сайтов, упомянутых в этом параграфе 7, не включено и, за исключением информации, специально включенной посредством ссылки в это объявление, не является его частью. Запросы: Allied Bidco / Allied Universal Стив Джонс, президент и главный исполнительный директор через Тенео Тенео, советник по связям с общественностью Allied Universal и Allied Bidco Чарльз Армитстед + 44 7703 330 269 Мэтт Денхэм + 44 7825 735 596 Morgan Stanley, в качестве ведущего финансового советника Allied Universal and Allied Bidco Генри Стюарт / Лоуренс Хопкинс / Дэвид Хайят +44 20 7425 8000 / Дункан Уильямсон / Том Перри Credit Suisse в качестве совместного финансового советника Allied Universal и Allied Bidco Раймонд Р.Раймонди-младший / Джо Хэннон / Бен Дири +44 20 7888 8888 Moelis & Company, в качестве совместного финансового советника Allied Universal и Allied Bidco Джонатан Кэй +1212883 3800 Лиам Бир G4S Хелен Пэррис, директор по связям с инвесторами + 44 20 7963 3189 Запросы СМИ: Софи Макмиллан, руководитель отдела СМИ + 44 20 7963 3333 Brunswick, советник по связям с общественностью G4S Чарльз Претцлик / Джонатан Гласс + 44 20 7404 5959 Citigroup Global Markets Limited, в качестве совместного ведущего финансового консультанта и корпоративного брокера G4S Эндрю Ситон / Роберт Уэй / Уильям Мортон + 44 20 7986 4000 Дж.П. Морган Казенов, в качестве главного финансового консультанта и корпоративного брокера G4S Эдмунд Байерс / Селия Мюррей / Ричард Уолш + 44 20 7742 4000 Goldman Sachs, в качестве финансового советника G4S Марк Соррелл / Хосе Баррето + 44 (20 7774 1000 Lazard, as Финансовый советник G4S Уильям Ракер / Николас Пейдж + 44 20 7187 2000 Cleary Gottlieb Steen & Hamilton LLP, Freshfields Bruckhaus Deringer LLP и Kirkland & Ellis LLP наняты в качестве юридических советников Allied Universal и Allied Bidco. Linklaters LLP остается в качестве юридического советника для G4S.Важные уведомления, касающиеся финансовых консультантов Morgan Stanley & Co. International plc («Morgan Stanley»), которые уполномочены Управлением пруденциального регулирования («PRA») и регулируются Управлением финансового надзора («FCA») и PRA в США. Kingdom выступает исключительно в качестве ведущего финансового консультанта Allied Universal и Allied Bidco и никого другого в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении. В связи с такими вопросами Morgan Stanley, его аффилированные лица и их соответствующие директора, должностные лица, сотрудники и агенты не будут рассматривать какое-либо другое лицо как своего клиента, а также не будут нести ответственность перед любым другим лицом за обеспечение защиты, предоставляемой их клиентам, или за предоставление рекомендаций относительно содержания этого объявления или любого другого вопроса, упомянутого в нем.Credit Suisse International («Credit Suisse»), который уполномочен PRA и регулируется FCA и PRA в Соединенном Королевстве, действует в качестве совместного финансового консультанта исключительно для Allied Universal и Allied Bidco и никого другого в связи с вопросы, изложенные в этом объявлении, и не будет нести ответственность перед каким-либо лицом, кроме Allied Universal и Allied Bidco, за обеспечение защиты, предоставляемой клиентам Credit Suisse, а также за предоставление рекомендаций в отношении содержания этого объявления или любых вопросов, упомянутых в нем. .Ни Credit Suisse, ни какие-либо из его дочерних компаний, филиалов или аффилированных лиц не имеют и не принимают на себя никаких обязательств, обязательств или ответственности (будь то прямые или косвенные, будь то договорные, правонарушения, законные или иные) перед лицом, не являющимся клиентом Credit Suisse в связи с этим объявлением, любым содержащимся в нем заявлением или иным образом. Moelis & Company LLC («Moelis & Company») действует исключительно как совместный финансовый консультант Allied Universal и Allied Bidco и никого другого в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении.В связи с такими вопросами Moelis & Company, ее аффилированные лица и их соответствующие директора, должностные лица, сотрудники и агенты не будут рассматривать какое-либо другое лицо как своего клиента, а также не будут нести ответственность перед любым другим лицом за обеспечение защиты, предоставляемой их клиентам или для предоставления рекомендаций относительно содержания этого объявления или любого другого вопроса, упомянутого в нем. Citigroup Global Markets Limited («Citi»), которая уполномочена PRA и регулируется в Великобритании FCA и PRA, выступает в качестве совместного ведущего финансового консультанта для Компании и никого другого в связи с изложенными вопросами. в этом объявлении и не будет нести ответственности перед кем-либо, кроме Компании, за обеспечение защиты, предоставляемой клиентам Citi, или за предоставление рекомендаций в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении.Ни Citi, ни какие-либо из его аффилированных лиц, директоров или сотрудников не имеют и не принимают на себя никаких обязательств, обязательств или ответственности (будь то прямые или косвенные, косвенные, будь то по контракту, правонарушению, правонарушению, по закону или иным образом) перед любым лицом, которое не клиент Citi в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении, или любыми другими вопросами или договоренностями, упомянутыми в нем. J.P. Morgan Securities plc (которая ведет свой инвестиционно-банковский бизнес в Великобритании как J.P. Morgan Cazenove) («J.P. Morgan Cazenove »), который уполномочен в Соединенном Королевстве PRA и регулируется в Соединенном Королевстве PRA и FCA, действует в качестве совместного ведущего финансового консультанта исключительно для Компании и никого другого в связи с установленными вопросами. в этом объявлении и не будет рассматривать какое-либо другое лицо в качестве своего клиента в отношении вопросов, изложенных в этом объявлении, и не будет нести ответственности перед кем-либо, кроме Компании, за обеспечение защиты, предоставляемой клиентам J.P. Morgan Cazenove или ее аффилированным лицам, а также за предоставление консультаций по вопросам, изложенным в этом объявлении, или по любым другим вопросам или договоренностям, упомянутым в нем. Goldman Sachs International («Goldman Sachs»), который уполномочен в Соединенном Королевстве PRA и регулируется в Соединенном Королевстве PRA и FCA, действует исключительно для Компании в качестве финансового консультанта и никого другого в связи с вопросы, изложенные в этом объявлении. Goldman Sachs не несет ответственности перед кем-либо, кроме Компании, за обеспечение защиты, предоставляемой клиентам Goldman Sachs, или за предоставление рекомендаций в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении, или за любые другие вопросы, упомянутые в этом документе.Компания Lazard & Co., Limited («Лазард»), которая уполномочена и регулируется в Соединенном Королевстве FCA, действует исключительно в качестве финансового консультанта Компании, и никто другой в связи с вопросами, изложенными в этом объявлении, не будет не несет ответственности перед кем-либо, кроме Компании, за обеспечение защиты, предоставляемой клиентам Lazard, или за предоставление консультаций по вопросам, изложенным в этом объявлении. Ни Lazard, ни какие-либо из ее аффилированных лиц не имеют и не принимают на себя никаких обязательств, обязательств или ответственности (будь то прямые или косвенные, будь то по контракту, в результате деликта, по закону или иным образом) перед любым лицом, которое не является клиентом Lazard в связи с этими вопросами. изложенное в этом объявлении, любое заявление, содержащееся в нем или иным образом.В соответствии с Городским кодексом, обычной рыночной практикой Соединенного Королевства и Правилом 14e-5 (b) Закона о биржах США, Morgan Stanley, Credit Suisse, Citi, JP Morgan Cazenove, Goldman Sachs и Lazard и их соответствующие аффилированные лица будут продолжать действовать. действовать в качестве связанного освобожденного основного трейдера акций G4S на Лондонской фондовой бирже. Об этих покупках и деятельности связанных основных трейдеров, освобожденных от уплаты налогов, которые должны быть опубликованы в Соединенном Королевстве в соответствии с Городским кодексом, будет сообщено в Службу нормативной информации, и они будут доступны на веб-сайте Лондонской фондовой биржи по адресу www.londonstockexchange.com. Эта информация также будет публично раскрыта в Соединенных Штатах в той мере, в какой такая информация станет общедоступной в Соединенном Королевстве. Дополнительная информация Это объявление не предназначено и не составляет и не является частью предложения, приглашения или ходатайства о предложении купить, иным образом приобрести, подписаться, продать или иным образом распорядиться любыми ценными бумагами или ходатайством о голосовании. или одобрение в любой юрисдикции в соответствии с Предложением или иным образом, а также не должно быть никакой продажи, выпуска или передачи ценных бумаг G4S в соответствии с Предложением в любой юрисдикции в нарушение применимого законодательства.Предложение реализуется исключительно в соответствии с условиями Документа о предложении и, в отношении Акций G4S, хранящихся в документарной форме, Формы акцепта, которые вместе содержат полные условия и положения Предложения, включая подробные сведения о том, как принять Оферту. Любое решение Акционеров G4S в отношении Предложения или иной ответ на Предложение должно приниматься только на основе информации, содержащейся в Документе о предложении, а в отношении Акций G4S, хранящихся в документарной форме, — Форме акцепта.Акционерам G4S рекомендуется внимательно прочитать Документ о предложении и Форму акцепта, поскольку они содержат важную информацию в отношении Предложения. Информация, касающаяся акционеров G4S Обратите внимание, что адреса, электронные адреса и некоторая другая информация, предоставленная акционерами G4S, лицами с информационными правами и другими соответствующими лицами для получения сообщений от G4S, может быть предоставлена ​​Allied Bidco в течение Срока предложения в соответствии с требованиями Раздел 4 Приложения 4 Кодекса города соответствует Правилу 2.11. Дополнительная информация для акционеров G4S в США и держателей АДР G4S Предложение делается акционерам G4S, проживающим в США, в соответствии с разделом 14 (e) Закона США о биржах и Положением 14E по нему, а также в соответствии с ними. тендерное предложение «Уровня II» (как указано в Правиле 14d-1 (d) Закона США о биржах) и в иных отношениях в соответствии с требованиями Кодекса города. Предложение сделано в США компанией Allied Bidco и никем другим. Предложение относится к акциям компании, зарегистрированной в Соединенном Королевстве, и подлежит раскрытию в Соединенном Королевстве и другим процедурным требованиям, которые отличаются от определенных требований раскрытия информации и процедурных требований Соединенных Штатов.Кроме того, процедура оплаты и расчетов в отношении Предложения будет соответствовать соответствующим правилам Соединенного Королевства, которые отличаются от процедур платежей и расчетов в США, особенно в отношении даты выплаты вознаграждения. Предложение сделано в соответствии со всеми применимыми законами и нормативными актами, включая, насколько это применимо, Раздел 14 (e) Закона США о биржах и Правило 14E к нему в качестве тендерного предложения «Уровня II» (как указано в Правиле 14d. -1 (d) в соответствии с Законом США о биржах) и в противном случае в соответствии с требованиями Городского кодекса.В соответствии с обычной практикой Соединенного Королевства и в соответствии с Правилом 14e-5 (b) Закона США о биржах Allied Bidco, определенные аффилированные компании и их номинальные держатели или брокеры (действующие в качестве агентов) могут совершать определенные покупки или договоренности о покупке, доли в G4S, кроме как в соответствии с Предложением, в течение периода, в течение которого Предложение будет оставаться открытым для принятия (или, если Предложение реализуется посредством Схемы, до даты, на которую Схема вступает в силу, теряет силу или иным образом снято).Если бы такие покупки или договоренности о покупке производились, они бы производились за пределами Соединенных Штатов либо на открытом рынке по преобладающим ценам, либо в рамках частных сделок по договорным ценам и соответствовали бы применимому законодательству, включая, в соответствующих случаях, Закон США о валютных операциях. Любая информация о таких покупках будет раскрыта в соответствии с требованиями в Великобритании, будет передана в Службу нормативной информации и будет доступна на веб-сайте Лондонской фондовой биржи www.londonstockexchange.com. Определенная финансовая информация, включенная в это объявление и Документ с предложением, была подготовлена ​​в соответствии со стандартами бухгалтерского учета, действующими в Соединенном Королевстве, и может быть несопоставима с финансовой информацией компаний США или компаний, финансовая отчетность которых подготовлена ​​в соответствии с общепринятыми стандартами бухгалтерского учета. принципы в Соединенных Штатах. Получение вознаграждения Акционером G4S из США или Держателем АДР G4S за передачу его Акций G4S или его АДР G4S, в зависимости от обстоятельств, в соответствии с Предложением может быть налогооблагаемой транзакцией для целей федерального подоходного налога США и в соответствии с применимыми Соединенными Штатами. государственные и местные, а также неамериканские и другие налоговые законы.Каждому Акционеру G4S и Держателю АДР G4S рекомендуется немедленно проконсультироваться со своим независимым профессиональным консультантом относительно налоговых последствий Предложения и принятия Предложения, применимых к ним, в том числе в соответствии с применимыми федеральными, штатными и местными законами Соединенных Штатов, а также не- США и другие, налоговое законодательство. Акционерам G4S в США или держателям АДР G4S может быть сложно обеспечить соблюдение своих прав и требований, вытекающих из федеральных законов США о ценных бумагах, поскольку G4S организована в соответствии с законами Англии и Уэльса, а некоторые или все ее должностные лица и директора являются резидентами. из других стран, кроме США.Может оказаться невозможным подать иск против неамериканской компании или ее директоров, должностных лиц или аффилированных лиц в неамериканский суд за нарушение законов США о ценных бумагах. Может быть трудно заставить неамериканскую компанию и ее директоров, должностных лиц и аффилированные лица подчиниться юрисдикции и решению суда Соединенных Штатов. Ни Комиссия по ценным бумагам и биржам США, ни какая-либо комиссия штата США по ценным бумагам не одобрила и не отклонила Предложение, не одобрила справедливость предложения или не одобрила адекватность или точность этого документа.Любое заявление об обратном является уголовным преступлением в США. Дополнительная информация для датских акционеров G4S и держателей G4S VP Этот документ не является офертой в соответствии с датским законодательством о ценных бумагах, и, следовательно, не требуется, чтобы он был подан или утвержден Управлением финансового надзора Дании, поскольку этот документ не был подготовлен в контекст публичного предложения о поглощении в Дании по смыслу Датского Закона о рынках капитала или любых административных распоряжений, изданных в соответствии с ним.Зарубежные юрисдикции Выпуск, публикация или распространение этого объявления в юрисдикциях, отличных от Соединенного Королевства, или в других юрисдикциях, кроме Соединенного Королевства, может быть ограничено законом, и поэтому любые лица, подпадающие под действие законов любой юрисдикции, кроме Соединенного Королевства, должны информировать себя и соблюдать , любые применимые требования. В частности, способность лиц, не являющихся резидентами Соединенного Королевства, принять Предложение или заполнить и доставить Форму акцепта, может быть затронута законами соответствующих юрисдикций, в которых они находятся.Любое несоблюдение применимых ограничений может представлять собой нарушение законодательства о ценных бумагах любой такой юрисдикции. В максимальной степени, разрешенной применимым законодательством, компании и лица, участвующие в Предложении, не несут никакой ответственности за нарушение таких ограничений любым лицом. Это объявление было подготовлено с целью соблюдения английского законодательства и Городского кодекса, и раскрытая информация может отличаться от той, которая была бы раскрыта, если бы это объявление было подготовлено в соответствии с законами юрисдикций за пределами Соединенного Королевства. .Если иное не определено Allied Universal или не требуется Кодексом города и не разрешено применимым законодательством и нормативными актами, Предложение не предоставляется, прямо или косвенно, в пределах или из Ограниченной юрисдикции или любой другой юрисдикции, где это могло бы сделать это. нарушать законы в этой юрисдикции, и никто не может принять Предложение любым использованием, средствами или средствами (включая, помимо прочего, факсимильную связь, электронную почту или другую электронную передачу, телекс или телефон) межгосударственной или иностранной торговли или любого объекта национальной, государственной или другой биржи ценных бумаг любой Ограниченной юрисдикции, включая Соединенные Штаты или любую другую юрисдикцию, где это будет представлять собой нарушение законов этой юрисдикции, и Предложение не может быть принято любым таким использование, средства, приспособления или оборудование.Соответственно, копии этого объявления и любой официальной документации, относящейся к Предложению, не отправляются и не должны прямо или косвенно пересылаться по почте или иным образом пересылаться, распространяться или отправляться в или из любой Ограниченной юрисдикции или любой другой юрисдикции, где это необходимо сделать. это будет представлять собой нарушение законов этой юрисдикции, и лица, получающие такие документы (включая хранителей, номинальных держателей и доверенных лиц), не должны по почте или иным образом пересылать, распространять или отправлять их в или из или из любой Ограниченной юрисдикции или любой другой юрисдикции, где делать это будет представлять собой нарушение законов этой юрисдикции.Доступность Предложения для Акционеров G4S, которые не являются резидентами и гражданами Соединенного Королевства, может зависеть от законов соответствующих юрисдикций, в которых они находятся или гражданами которых они являются. Лица, не проживающие в Соединенном Королевстве, должны ознакомиться с любыми применимыми правовыми или нормативными требованиями своей юрисдикции и соблюдать их. Более подробная информация об Акционерах G4S в зарубежных юрисдикциях содержится в Документе о предложении. Предостережение относительно прогнозных заявлений Это объявление (включая информацию, включенную в объявление посредством ссылки), устные заявления, сделанные в отношении Предложения, и другая информация, опубликованная Allied Universal, Allied Bidco или G4S, содержит определенные прогнозные заявления в отношении финансового состояния. , результаты деятельности и бизнеса Allied Universal и G4S и их соответствующих групп, а также определенные планы и цели Allied Universal и G4S в отношении Расширенной группы.Все заявления, кроме заявлений об историческом факте, являются или могут считаться прогнозными заявлениями. Заявления о перспективах — это заявления о будущих ожиданиях, которые являются перспективными по своему характеру и основаны не на исторических фактах, а, скорее, на текущих ожиданиях, прогнозах и предположениях руководства и включают известные и неизвестные риски и неопределенности, которые могут привести к различию фактических результатов, показателей или событий. существенно от того, что выражено или подразумевается в этих заявлениях.Заявления прогнозного характера включают, среди прочего, заявления о потенциальной подверженности Allied Universal, Allied Universal Group, G4S и / или G4S Group рыночным рискам и заявления, выражающие ожидания, убеждения, оценки, прогнозы, прогнозы и предположения руководства, в том числе в отношении будущей потенциальной экономии затрат, синергии, прибыли, денежных потоков, средней рентабельности задействованного капитала, производства, продажи активов и перспектив. Часто, но не всегда, в этих прогнозных заявлениях используются такие термины и фразы, как «ожидаю» или «не ожидаю», «полагаю», «оцениваю», «прогнозирую», «ожидаю» или «не ожидаю». ожидать »,« ожидается »,« подлежит »,« цели »,« намерение »,« цели »,« перспективы »,« план »,« бюджет »,« запланировано »,« вероятно »,« проект », «Риски», «искать», «цель» или варианты таких слов и фраз и утверждений, что определенные действия, события или результаты «могут», «могли», «должны», «будут», «могут» или «будут» быть взяты, произойти или быть достигнуты.Существует ряд факторов, которые могут повлиять на будущую деятельность Allied Universal, Allied Universal Group, G4S и / или G4S Group и могут привести к тому, что результаты и события будут существенно отличаться от тех, которые выражены или подразумеваются в прогнозных заявлениях, включенных в это объявление, включая (без ограничений): (а) изменения спроса на продукцию Allied Universal и / или G4S; (б) колебания валютных курсов; (c) потеря доли рынка и отраслевой конкуренции; (d) риски, связанные с определением подходящей собственности, приобретателей и целей, а также с успешными переговорами и завершением таких сделок; (e) изменения макроэкономических или торговых условий; (f) влияние COVID-19; и (g) изменения в правительстве и нормативных актах, в том числе в отношении здоровья и безопасности.Другие неизвестные или непредсказуемые факторы могут привести к тому, что фактические результаты будут существенно отличаться от тех, что указаны в прогнозных заявлениях. Поэтому такие прогнозные заявления следует толковать в свете таких факторов. Все прогнозные заявления, содержащиеся в этом объявлении, полностью оговорены предостерегающими заявлениями, содержащимися или упомянутыми в этом разделе. Хотя Allied Universal, Allied Bidco и G4S считают, что ожидания, отраженные в таких прогнозных заявлениях, являются разумными, Allied Universal, Allied Bidco, G4S и их соответствующие партнеры, директора, должностные лица и советники не представляют, не заверяют и не гарантируют, что наступление события, выраженные или подразумеваемые в любых прогнозных заявлениях в этом объявлении, действительно произойдут.Читатели не должны чрезмерно полагаться на прогнозные заявления. Каждое прогнозное заявление действует только на дату этого объявления. Ни Allied Universal, ни Allied Bidco, ни Allied Universal Group, ни G4S, ни G4S Group не берет на себя никаких обязательств и прямо отказывается от каких-либо намерений или обязательств по публичному обновлению или пересмотру любых прогнозных заявлений в результате получения новой информации, будущих событий или иным образом. , за исключением случаев, предусмотренных законом (в том числе в соответствии с Правилами листинга Соединенного Королевства и Правилами раскрытия информации и прозрачности FCA).В свете этих рисков результаты могут существенно отличаться от заявленных, подразумеваемых или предполагаемых из прогнозных заявлений, содержащихся в этом объявлении. Никаких прогнозов или оценок Никакое заявление в этом объявлении не предназначено в качестве прогноза прибыли, оценки прибыли или количественного отчета о финансовых выгодах за любой период, и никакой отчет в этом объявлении не должен интерпретироваться как означающий, что денежный поток от операционной деятельности, свободный денежный поток, прибыль на акцию для Allied Universal, Allied Bidco, G4S или Enlarged Group, в зависимости от ситуации, в текущем или будущем финансовом году обязательно будет соответствовать или превышать соответствующий исторический опубликованный денежный поток от операций, свободный денежный поток, прибыль или прибыль на акцию для Allied Universal, Allied Bidco или G4S, в зависимости от ситуации, или для обозначения того, что прибыль Расширенной группы в первые 12 месяцев после предложения или в любой последующий период обязательно будет соответствовать или превышать прибыль Allied Bidco или G4S за соответствующий предыдущий финансовый период. или любой другой период.Публикация на веб-сайте Копия этого объявления и документы, требуемые Правилом 26 Кодекса города, будут доступны для ознакомления на веб-сайте Allied Universal (https: //www.securityservicesthereforyou. com /) и на веб-сайте G4S (https://www.g4s.com/investors/offers) не позднее 12 часов дня (по лондонскому времени) рабочего дня, следующего за датой этого объявления. Во избежание сомнений, содержание веб-сайтов, упомянутых в этом объявлении, не включено в это объявление и не является его частью.Акционеры G4S могут запросить печатную копию этого объявления, связавшись с Link Group по телефону 0371 664 0321 (если звоните в пределах Великобритании) или по телефону +44 371 664 0321 (если звоните из-за пределов Великобритании).